| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-24页 |
| ·牛副流感病毒 3 型的形态与特征 | 第14-15页 |
| ·BPIV3 的分子生物学特性 | 第15-17页 |
| ·病毒的复制机制 | 第17-18页 |
| ·BPIV3 的临床症状及病理变化 | 第18页 |
| ·BPIV3 的诊断 | 第18-19页 |
| ·病毒分离 | 第19页 |
| ·免疫荧光试验 | 第19页 |
| ·RT-PCR 检测方法 | 第19页 |
| ·BPIV3 的预防及控制 | 第19-20页 |
| ·RNA 病毒的反向遗传系统 | 第20-21页 |
| ·副流感病毒反向遗传操作研究进展 | 第21-23页 |
| ·副流感病毒作为病毒载体的安全性研究 | 第21页 |
| ·副流感病毒作为病毒载体的优势 | 第21页 |
| ·外源基因插入到副流感病毒载体基因组中的构建原则 | 第21-22页 |
| ·在病毒基因功能研究中的应用 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 BPIV3 NM09 分离株基因组测序及序列分析 | 第24-35页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·毒株 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·生物信息学软件 | 第25页 |
| ·序列分析所用 PIV3 基因组序列 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26页 |
| ·BPIV3 引物设计 | 第26-27页 |
| ·BPIV3 病毒的增殖与纯化 | 第27页 |
| ·BPIV3 总 RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·BPIV3 基因组 RNA 的反转录 PCR | 第28页 |
| ·PCR 产物回收 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·重组质粒构建 | 第29-30页 |
| ·BPIV3 基因组序列同源性分析 | 第30页 |
| ·BPIV3 基因组系统发育树分析 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-34页 |
| ·基因组片段 RT-PCR 扩增 | 第30页 |
| ·各基因组片段序列测定及基因组全长拼接 | 第30-31页 |
| ·BPIV3 基因组序列同源性分析结果 | 第31-32页 |
| ·BPIV3 基因组系统发育树分析结果 | 第32-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 BPIV3 NM09 株全基因组全长 CDNA 克隆的构建及辅助质粒构建 | 第35-45页 |
| ·全长 CDNA 的连接策略 | 第35-36页 |
| ·辅助质粒构建策略 | 第36-37页 |
| ·L 基因辅助质粒构建策略 | 第37页 |
| ·材料与方法 | 第37-39页 |
| ·病毒株与细胞 | 第37页 |
| ·试剂与载体 | 第37-38页 |
| ·核酶结构的引入 | 第38页 |
| ·全长构建引物设计 | 第38-39页 |
| ·辅助质粒构建引物设计 | 第39页 |
| ·重组质粒的提取 | 第39页 |
| ·全长 cDNA 克隆及辅助质粒鉴定 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-43页 |
| ·覆盖全长各目的片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·全长 cDNA 克隆 pcDNA3.1-NM09 的连接结果 | 第40页 |
| ·全长 cDNA 克隆 pcDNA3.1-NM09 的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·全长 cDNA 克隆 pcDNA3.1-NM09 测序鉴定 | 第41页 |
| ·引入 AgeI 酶切位点鉴定 | 第41页 |
| ·核酶的鉴定 | 第41-42页 |
| ·辅助质粒的 PCR 鉴定 | 第42-43页 |
| ·辅助质粒的酶切鉴定 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 NM09 株重组 BPIV3 的拯救及鉴定 | 第45-50页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·细胞 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-47页 |
| ·高纯质粒的制备 | 第45-46页 |
| ·质粒浓度测定 | 第46页 |
| ·转染细胞的制备 | 第46页 |
| ·转染拯救重组病毒 | 第46-47页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-49页 |
| ·质粒浓度 | 第47页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 第五章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
