灰色链霉菌RX-17溶菌酶基因文库的构建及筛选
| 目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-28页 |
| 1. 溶菌酶的理化性质 | 第10-16页 |
| ·溶菌酶的分型 | 第11页 |
| ·溶菌酶的溶菌谱 | 第11-12页 |
| ·溶菌酶的分布 | 第12-13页 |
| ·动物溶菌酶 | 第12页 |
| ·植物溶菌酶 | 第12-13页 |
| ·微生物溶菌酶 | 第13页 |
| ·溶菌酶的结构 | 第13-15页 |
| ·溶菌酶的催化机制 | 第15-16页 |
| 2 溶菌酶的应用 | 第16-19页 |
| ·溶菌酶在食品工业中的应用 | 第16-17页 |
| ·食品防腐剂 | 第16-17页 |
| ·食品保鲜剂 | 第17页 |
| ·溶菌酶营养、保健功能的应用 | 第17-18页 |
| ·溶菌酶在医药方面的应用 | 第18-19页 |
| ·溶菌酶在农业上的应用 | 第19页 |
| 3 溶菌酶的应用前景 | 第19-20页 |
| 4 溶菌酶的分子生物学研究 | 第20-23页 |
| 5 关于基因文库的构建 | 第23-24页 |
| 6 大肠杆菌中的包涵体 | 第24-25页 |
| ·包涵体的形成和性质 | 第24页 |
| ·减少包涵体形成的策略 | 第24-25页 |
| ·降低重组菌的生长温度 | 第24-25页 |
| ·促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂 | 第25页 |
| 7 本课题立题依据及前景分析 | 第25-26页 |
| 8 本课题研究的主要内容、目的、意义 | 第26-28页 |
| ·研究内容 | 第26页 |
| ·研究目的 | 第26-27页 |
| ·研究意义 | 第27-28页 |
| 第二章 灰色链霉菌RX-17溶菌酶基因文库的构建 | 第28-44页 |
| ·材料和设备 | 第28-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-36页 |
| ·灰色链霉菌的菌体纯化培养 | 第30页 |
| ·链霉菌染色体DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·基因组DNA的酶切试验 | 第31-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳技术 | 第33页 |
| ·大量DNA的部分酶切 | 第33页 |
| ·克隆载体PUC19 DNA的制备 | 第33-34页 |
| ·BamH Ⅰ单酶切pUC19质粒 | 第34页 |
| ·连接反应 | 第34页 |
| ·CaCl_2法转化大肠杆菌 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·转化反应 | 第35页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第35页 |
| ·转化质粒的提取 | 第35页 |
| ·菌种保藏技术 | 第35-36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-43页 |
| ·总DNA提取检测 | 第36-37页 |
| ·总DNA紫外检测 | 第37页 |
| ·总DNA的限制性酶切验证 | 第37-38页 |
| ·小量酶切检测部分降解的反应条件 | 第38页 |
| ·低琼脂糖凝胶电泳回收目的DNA及检测 | 第38-39页 |
| ·碱裂解法提取质粒纯度检测 | 第39页 |
| ·酶切后质粒检测及切胶回收 | 第39-40页 |
| ·CIAP末端去磷酸化与连接 | 第40页 |
| ·重组子的筛选策略 | 第40-42页 |
| ·基因文库的扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒的保存 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第三章 灰色链霉菌RX-17溶菌酶基因文库的筛选 | 第44-55页 |
| ·材料和设备 | 第44-45页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-47页 |
| ·重组子菌体的低温诱导培养 | 第45-46页 |
| ·重组子菌体细胞的破碎 | 第46页 |
| ·重组子菌体细胞破碎液的酶活力测定 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第46页 |
| ·重组质粒pUC19-R的提取 | 第46页 |
| ·限制性酶切鉴定重组质粒 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的PCR分析 | 第47页 |
| ·重组子的PCR检测 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-52页 |
| ·重组子质粒的物理图谱 | 第47-48页 |
| ·重组子在大肠杆菌中表达 | 第48-50页 |
| ·胞内酶活测定 | 第48-49页 |
| ·胞外酶活测定 | 第49-50页 |
| ·20号菌沸水浴前后酶活比较 | 第50页 |
| ·诱导表达产物鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组子质粒的验证 | 第51-52页 |
| ·重组子的PCR检测 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| ·展望 | 第53-55页 |
| 总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
