| 内容提要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 目录 | 第4-7页 |
| 序言 | 第7-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-34页 |
| 1 脂肪酶概述 | 第9页 |
| 2 酿酒酵母表达系统 | 第9-25页 |
| ·酿酒酵母基因工程的载体系统 | 第10-13页 |
| ·酿酒酵母的转化选择系统 | 第13-15页 |
| ·酿酒酵母的转化系统 | 第15-17页 |
| ·影响外源基因在酿酒酵母中表达的因素 | 第17-25页 |
| 3 脂肪酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第25-29页 |
| ·哺乳动物脂肪酶在酿酒酵母中的表达 | 第26页 |
| ·细菌脂肪酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第26页 |
| ·真菌脂肪酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第26-27页 |
| ·影响脂肪酶基因在酿酒酵母中的表达的因素 | 第27-29页 |
| 4 脂肪酶的分子改造 | 第29-32页 |
| ·脂肪酶的理性设计 | 第30-31页 |
| ·脂肪酶的定向进化 | 第31-32页 |
| ·理性设计与非合理设计的结合 | 第32页 |
| 5 脂肪酶的研究展望 | 第32-34页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第34-50页 |
| 1 材料 | 第34-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-50页 |
| ·扩展青霉碱性脂肪酶成熟肽基因lip在酿酒酵母中的表达 | 第37-44页 |
| ·目的基因的获得 | 第37-38页 |
| ·克隆载体pSK-lip的构建 | 第38-41页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·扩展青霉碱性脂肪酶成熟肽基因lip在酿酒酵母中的表达 | 第42-44页 |
| ·带有自身信号肽脂肪酶基因lip07在酿酒酵母中的表达 | 第44-45页 |
| ·目的基因的获得 | 第44页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·脂肪酶基因lip07在酿酒酵母中的表达(参见2.1.4) | 第45页 |
| ·S78-pVT102U/α-lip发酵条件的初步优化 | 第45-46页 |
| ·PEL-S227P定点突变 | 第46-50页 |
| ·突变基因lip07-S227P的获得 | 第46-47页 |
| ·突变体克隆载体的构建及筛选 | 第47-48页 |
| ·突变基因在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达 | 第48-50页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第50-65页 |
| 1 脂肪酶成熟肽基因lip在酿酒酵母中的表达 | 第50-54页 |
| ·表达质粒pVT102U/α-lip的构建 | 第50-51页 |
| ·重组酵母菌S78-pVT102U/α-lip的筛选 | 第51-52页 |
| ·脂肪酶基因lip在酵母中的表达 | 第52-54页 |
| ·表达质粒pVT102U/α-lip在Saccharomycescerevisiae中的稳定性 | 第54页 |
| 2 带有自身信号肽脂肪酶基因lip07在酿酒酵母中的表达 | 第54-57页 |
| ·表达质粒pVT102U/α-L-lip07的构建 | 第54页 |
| ·重组酵母菌S78-pVT102U/α-L-lip07的筛选 | 第54-55页 |
| ·脂肪酶基因lip07在酵母中的表达 | 第55-57页 |
| 3 脂肪酶酿酒酵母工程菌发酵条件的优化 | 第57-61页 |
| ·不同移种量对脂肪酶酶活的影响 | 第57-58页 |
| ·不同发酵起始pH对脂肪酶酶活的影响 | 第58-59页 |
| ·不同碳源对脂肪酶酶活的影响 | 第59-60页 |
| ·不同培养基组分对脂肪酶酶活的影响 | 第60-61页 |
| 4 S227P定点突变 | 第61-65页 |
| ·突变点的选择 | 第61-62页 |
| ·突变基因S227P的获得 | 第62-63页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第63-65页 |
| 第四部分 讨论与小结 | 第65-68页 |
| 1 讨论 | 第65-66页 |
| 2 小结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 英文缩略词表 | 第77-78页 |
| 中文摘要 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
