| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 论文 | 第13-57页 |
| 第一章 盐藻DsGPD表达载体构建及其根癌农杆菌转化 | 第13-23页 |
| 1 材料与方法 | 第14-16页 |
| ·材料 | 第14页 |
| ·菌株和质粒 | 第14页 |
| ·酶与试剂盒 | 第14页 |
| ·引物及测序 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-16页 |
| ·载体pCAMBIA2301G-DsGPD的构建 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2法感受态细胞的制备及转化 | 第15页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第15页 |
| ·用PCR方法检测连接子 | 第15-16页 |
| 2 结果与分析 | 第16-18页 |
| ·载体pCAMBIA2301G-DsGPD的构建示意图 | 第16页 |
| ·载体pCAMBIA2301G的酶切鉴定 | 第16页 |
| ·载体pCAMBIA2301G-DsGPD的构建 | 第16页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第16-18页 |
| 3.讨论 | 第18-23页 |
| ·报告基因的选择 | 第19-20页 |
| ·选择性标记基因的选择 | 第20页 |
| ·marker-free | 第20-21页 |
| ·启动子的选择 | 第21-23页 |
| 第二章 中苜一号紫花苜蓿基因转化受体系统的建立 | 第23-34页 |
| 1 材料和方法 | 第23-27页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·根癌农杆菌菌株，大肠杆菌质粒 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-27页 |
| ·农杆菌的培养 | 第25页 |
| ·植物材料的制备 | 第25-26页 |
| ·农杆菌直接浸染中苜一号外植体 | 第26页 |
| ·培养基中卡那霉素对愈伤形成的影响 | 第26页 |
| ·愈伤诱导及分化 | 第26-27页 |
| ·再生苗的移栽 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-31页 |
| ·选择培养基中Km(卡那霉素)的有效工作浓度 | 第27页 |
| ·农杆菌浓度对愈伤组织诱导的影响 | 第27-29页 |
| ·不同外植体的愈伤诱导及分化情况 | 第29-30页 |
| ·愈伤组织的分化及苗的再生 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-34页 |
| ·外植体选择对愈伤诱导及分化的影响 | 第31页 |
| ·激素对愈伤组织诱导和分化的影响 | 第31-32页 |
| ·Km浓度的选择 | 第32页 |
| ·转化中的注意事项 | 第32-34页 |
| 第三章 苜蓿转化方法的筛选 | 第34-49页 |
| 1 材料和方法 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·根癌农杆菌菌株，大肠杆菌质粒 | 第34页 |
| ·植物材料 | 第34-35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·农杆菌的培养 | 第35页 |
| ·质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·植物材料的制备 | 第36页 |
| ·真空泵抽负压转化 | 第36-37页 |
| ·超声波震荡浸染 | 第37页 |
| ·GUS染色 | 第37页 |
| ·电击法直接将DNA转入苜蓿愈伤 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·超声波震荡对农杆菌转化效率的影响 | 第38-42页 |
| ·真空负压法对农杆菌转化效率的影响 | 第42-43页 |
| ·电转化对苜蓿愈伤组织转化条件的优化 | 第43页 |
| ·农杆菌浸染叶片和电转化愈伤组织后GUS基因的表达检测 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-49页 |
| ·不同转化方法对苜蓿基因转化效率的影响 | 第45-46页 |
| ·提高农杆菌转化效率的方法 | 第46-48页 |
| ·利用GUS基因快速检测转基因苜蓿的转化率 | 第48-49页 |
| 第四章 转DsGPD基因苜蓿的分子鉴定 | 第49-55页 |
| 1.材料与方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·酶与试剂盒 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49-50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·CTAB法小量抽提植物总DNA | 第50页 |
| ·转基因苜蓿的PCR检测 | 第50-51页 |
| 2 结果 | 第51-52页 |
| ·转基因苜蓿总DNA | 第51-52页 |
| ·转基因苜蓿的PCR检测 | 第52页 |
| ·转基因阳性苗的快繁 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 4 展望 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 综述 关于植物耐盐以及植物遗传转化的研究进展 | 第57-77页 |
| 一.植物适应盐胁迫的策略 | 第57-59页 |
| 二.杜氏藻在胁迫时甘油的合成 | 第59-61页 |
| 1.甘油代谢的碳源 | 第60-61页 |
| 2.杜氏藻中促进甘油大量合成的酶 | 第61页 |
| 三.植物盐胁迫的研究 | 第61-64页 |
| 1.植物耐盐的机制 | 第61-62页 |
| 2.研究植物耐盐的方法 | 第62-64页 |
| ·生物信息数据库 | 第63页 |
| ·功能鉴定 | 第63-64页 |
| 四.植物遗传转化的方法 | 第64-69页 |
| 1.载体介导法 | 第65-66页 |
| 2.DNA直接导入法 | 第66-69页 |
| 五.转基因苜蓿的研究进展 | 第69-74页 |
| 六.展望 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 声明 | 第84页 |
