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猕猴胚胎干细胞的分离、鉴定、培养及应用研究

摘要第1-5页
Abstract第5-17页
第一章 胚胎干细胞研究进展第17-37页
   ·胚胎干细胞概述第17页
   ·胚胎干细胞研究中常用名词的概念第17-18页
     ·ES 细胞(Embryonic Stem Cell,ES)第17页
     ·EC 细胞(Embryonic Carcinoma Cell,EC)第17页
     ·EG 细胞(Embryonic Germ Cell,EG)第17-18页
   ·胚胎干细胞建系的研究历程第18页
   ·胚胎干细胞建系路线第18-19页
     ·依制备方法不同分类第18页
       ·机械法第18页
       ·免疫手术法第18页
     ·依ES 细胞来源不同分类第18-19页
       ·囊胚法第18页
       ·胚胎原始生殖细胞(PGCs)法第18页
       ·核移植细胞法第18-19页
   ·建立和维持胚胎干细胞的条件第19-23页
     ·饲养层第19-20页
     ·培养基组成第20页
     ·条件培养基第20-21页
     ·细胞因子对ES 细胞的影响第21-22页
       ·分化抑制因子??白血病抑制因子(LIF)第21页
       ·干细胞生长因子(SCF)第21-22页
       ·碱性成纤维细胞生长因子(bFGF-)第22页
       ·其它生长因子第22页
     ·增殖的ICM、胚胎干细胞的离散及扩大培养第22-23页
   ·胚胎干细胞的生物学特性及鉴定方法第23-25页
     ·形态和生长特征第23页
     ·核型分析第23页
     ·碱性磷酸酶((Alkaline Phosphatase,AKP)活性测定第23页
     ·胚胎干细胞特异性表面抗原的表达第23页
     ·胚胎干细胞的端粒酶活性第23-24页
     ·细胞冷冻和解冻第24页
     ·转录因子Oct-4 的表达第24页
     ·体内外分化能力鉴定第24-25页
   ·人胚胎干细胞建系中存在的问题第25-26页
   ·胚胎干细胞的分化研究第26-29页
     ·ES 细胞分化研究的理论基础第26-27页
       ·内源性因素第26页
       ·外源性因素第26-27页
         ·分化诱导第26页
         ·分化抑制第26-27页
         ·细胞外物质的介导作用第27页
     ·ES细胞的分化研究现状第27-28页
       ·向神经细胞的定向分化第27页
       ·向造血细胞的定向分化第27页
       ·向内皮细胞的定向分化第27-28页
       ·向其它细胞定向分化的研究第28页
         ·由小鼠ES细胞向其它细胞定向分化第28页
         ·由蛙ES细胞向其它细胞定向分化第28页
         ·由人ES细胞向其它细胞定向分化第28页
     ·ES细胞在细胞替代治疗中的潜在应用价值第28-29页
       ·血液系统疾病第28页
       ·神经系统疾病第28-29页
       ·肝脏疾病第29页
   ·ES细胞分化研究尚需解决的问题第29-31页
     ·定向诱导分化ES细胞为特定类型的功能细胞第29页
     ·定向诱导分化ES细胞为有功能的器官第29页
     ·定向诱导分化的可调性第29-30页
     ·组织相容性问题第30页
     ·ES细胞的遗传学稳定性问题第30-31页
 参考文献第31-37页
第二章 猕猴 ES 细胞的分离、鉴定及体外培养体系的建立第37-58页
   ·前言第37-38页
   ·材料与方法第38-44页
     ·材料第38-40页
       ·实验动物及细胞系第38页
       ·主要化学试剂第38-39页
       ·主要试剂第39-40页
       ·实验用具第40页
       ·主要仪器第40页
     ·方法第40-44页
       ·鼠胚成纤维细胞(PMEFs)的制备及培养第40-41页
         ·Balb/c 鼠的交配第40页
         ·PMEFs 的制备及培养第40-41页
       ·PMEFs 生长分裂抑制的处理及冻存第41-42页
         ·丝裂霉素 C 处理法第41页
         ·γ-射线辐照处理法第41-42页
       ·猕猴囊胚的获得第42页
       ·猕猴胚胎干细胞(ES)的分离及培养第42-43页
       ·ES 细胞培养一般程序第43页
       ·ES 细胞克隆的消化分离及冻存第43页
       ·猕猴胚胎干细胞核型的鉴定第43-44页
       ·猕猴胚胎干细胞未分化特性—碱性磷酸酶(AKP)活性的测定第44页
       ·猕猴胚胎干细胞多能性分化的初步分析第44页
   ·结果与讨论第44-56页
     ·源于囊胚的猕猴类胚胎干细胞的分离、培养和初步鉴定第44-52页
       ·猕猴囊胚的获得第44-47页
       ·猕猴类胚胎干细胞的分离和持续培养第47-50页
         ·RS5 细胞的形态特征观察第48-49页
         ·RS5 细胞的生长特征观察第49-50页
       ·RS5 细胞核型的鉴定第50页
       ·碱性磷酸酶活性的测定第50-51页
       ·RS5 细胞多能性分化的初步分析第51页
       ·讨论第51-52页
       ·结论第52页
     ·RS366.4 猕猴胚胎干细胞培养体系的建立第52-56页
       ·PMEFs 的获得及处理第52页
       ·培养基对 ES 细胞活性的影响第52-53页
       ·冷冻剂对 PMEFs 及 ES 细胞活性的影响第53页
       ·消化液及其消化方式对 ES 细胞扩增活性的影响第53页
       ·不同培养时间ES 细胞的碱性磷酸酶活性测定第53-54页
       ·体外定向分化实验的关键——类胚胎的获得第54-55页
       ·结论第55-56页
 参考文献第56-58页
第三章 胚泡着床窗口期的分子调控研究进展第58-87页
   ·前言第58-59页
   ·子宫内膜对着床的可接受性第59-60页
   ·前列腺素(PG)和环氧合酶(COX)与着床窗口第60页
   ·降钙素第60-61页
   ·组织胺第61页
   ·同源盒(Hox)基因与着床窗口第61-62页
   ·着床窗口的细胞粘附分子第62-65页
     ·整合素第62页
     ·Basigin第62-63页
     ·Trophinin、Tastin 和 Bystin第63页
     ·粘液素-1(Muc-1)第63页
     ·CD9第63-64页
     ·CD44第64页
     ·上皮细胞钙粘蛋白第64页
     ·连接蛋白第64-65页
     ·PECAM-1第65页
   ·蜕膜细胞的作用第65页
   ·细胞外基质降解酶类第65-68页
   ·细胞因子第68-78页
     ·表皮生长因子家族第68-72页
       ·EGF 与哺乳动物的胚胎着床第68-69页
       ·转化生长因子α(TGF-α)与哺乳动物的胚胎着床第69-70页
       ·肝素结合相 EGF 样生长因子(HB-EGF)与哺乳动物的胚胎着床第70页
       ·两性调节蛋白(AR)与哺乳动物的胚胎着床第70-71页
       ·β-细胞调节素(BTC)与哺乳动物的胚胎着床第71页
       ·Epiregulin 与哺乳动物的胚胎着床第71-72页
       ·NDF(neu differentiation factors)与哺乳动物的胚胎着床第72页
     ·白介素-1 家族第72-74页
       ·IL-1家族的组成与信号转导第72-73页
       ·IL-1家族与着床前胚胎发育第73页
       ·IL-1与着床第73-74页
     ·白血病抑制因子第74-78页
       ·LIF 概况第75页
         ·LIF 的基因和蛋白结构第75页
         ·LIF 受体第75页
       ·启动胚胎着床第75-76页
       ·LIF的卵巢激素调控第76页
       ·LIF与细胞因子间的相互调节第76-77页
       ·研究前景及意义第77-78页
 参考文献第78-87页
第四章 胚胎着床中 LIF 对细胞滋养层细胞分化的影响效应研究第87-121页
   ·前言第87-89页
   ·材料与方法第89-91页
     ·材料第89-90页
       ·实验动物与细胞第89页
       ·主要化学试剂第89页
       ·主要溶液第89页
       ·实验用具第89-90页
       ·主要仪器第90页
     ·方法第90-91页
       ·鼠胚成纤维细胞的制备及培养第90页
       ·猕猴 R366.4 ES 细胞系的培养第90页
       ·碱性磷酸酶(AKP)活性的测定第90页
       ·LIF 对滋养层细胞分化的影响效应研究第90页
       ·免疫组化的测定第90-91页
       ·细胞流式仪测定处理细胞的 DNA 含量第91页
       ·细胞流式仪测定处理细胞表面抗原含量第91页
   ·结果第91-115页
     ·LIF 对 RS366.4 细胞形态的影响第91-94页
     ·RS366.4 细胞分化状况的确定——碱性磷酸酶活性测定第94-96页
     ·LIF 对 RS366.4 细胞增殖的影响第96-106页
     ·细胞免疫组化结果第106-113页
     ·细胞流式仪测定处理细胞表面抗原含量第113-115页
   ·讨论第115-117页
 参考文献第117-121页
第五章 利用胚胎干细胞作为细胞模型进行痂囊腔菌素光敏生物活性的研究-第121-140页
   ·前言第121-122页
   ·材料与方法第122-124页
     ·材料第122-123页
       ·实验动物、细胞系和细菌菌株第122页
       ·主要化学试剂第122页
       ·主要溶液第122-123页
       ·实验器具第123页
       ·主要仪器第123页
     ·方法第123-124页
       ·三种北醌化合物的生物合成、分离及结构鉴定第123页
       ·Kirby-Bauer 纸片扩散法测定 EA、HA、HB 抗菌生物活性第123-124页
       ·R366.4 细胞的光敏细胞毒性测定第124页
       ·EA、HA 及 HB 对 Hce-8693 细胞的抑制效应测定第124页
       ·EA 对 816 细胞的抑制效应测定第124页
       ·可见光光照第124页
       ·细胞流式仪分析第124页
       ·统计学分析第124页
   ·结果第124-134页
     ·三种北醌化合物的生物合成、分离及结构鉴定第124-126页
     ·EA、HA、HB 抗菌生物活性第126-128页
     ·R366.4 细胞的光敏细胞毒性测定第128-129页
     ·EA 对肿瘤细胞系的光敏抑制效应测定第129-131页
       ·EA 诱导 Hce-8693 细胞凋亡的光敏抑制效应测定第129-130页
       ·EA 诱导816 细胞凋亡的光敏抑制效应测定第130-131页
     ·HA 诱导Hce-8693 细胞凋亡的光敏抑制效应测定第131-132页
     ·HB 诱导Hce-8693 细胞凋亡的光敏抑制效应测定第132-133页
     ·EA、HA 及HB 对Hce-8693 细胞的抑制效应测定第133-134页
   ·讨论第134-135页
   ·结论第135-136页
 参考文献第136-140页
第六章 结论第140-143页
在学期间发表文章目录第143-144页
致谢第144页

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