| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-46页 |
| 1 转基因农作物研究进展 | 第16-24页 |
| ·商品化转基因农作物研究状况 | 第16-21页 |
| ·商品化转基因品种及所函基因 | 第21-24页 |
| 2 国际社会及我国对转基因植物及其产品的管理要求 | 第24-27页 |
| ·转基因的安全性问题 | 第24-26页 |
| ·各国政府对转基因植物及其产品的管理要求 | 第26-27页 |
| 3 转基因植物及其产品检测方法研究进展 | 第27-42页 |
| ·转基因产品检测方法建立的基础 | 第27-28页 |
| ·检测方法 | 第28-42页 |
| ·蛋白质检测 | 第29-32页 |
| ·ELISA方法 | 第29-31页 |
| ·试纸条检测方法 | 第31-32页 |
| ·Western杂交检测方法 | 第32页 |
| ·DNA检测 | 第32-42页 |
| ·Southern杂交方法 | 第33页 |
| ·基因芯片检测方法 | 第33页 |
| ·PCR检测方法 | 第33-42页 |
| (1) PCR方法原理 | 第35-36页 |
| (2) 荧光PCR方法原理 | 第36-42页 |
| 4 转基因植物品种特异性鉴定方法研究进展 | 第42-46页 |
| ·转基因植物品种特异性鉴定方法研究情况 | 第43页 |
| ·扩增未知序列DNA片段的PCR技术研究进展 | 第43-46页 |
| ·反向PCR(Inverse PCR)原理 | 第44页 |
| ·同端化PCR(UT-PCR)原理 | 第44-46页 |
| 第二章 转基因植物外源基因PCR检测方法的建立 | 第46-63页 |
| 1 材料和方法 | 第46-48页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·转基因材料 | 第46页 |
| ·试剂及溶液 | 第46-48页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-52页 |
| ·样品DNA的提取与纯化 | 第49页 |
| ·DNA纯度和浓度测定 | 第49-50页 |
| ·定性PCR检测 | 第50-52页 |
| ·PCR反应体系 | 第50页 |
| ·反应体系对照的设置 | 第50页 |
| ·PCR反应程序 | 第50-51页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第51页 |
| ·PCR产物的回收 | 第51-52页 |
| ·PCR扩增产物DNA的测序 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-60页 |
| ·不同方法提取总DNA质量的比较 | 第52-54页 |
| ·植物内源18SrRNA基因的扩增与假性结果的预防 | 第54页 |
| ·35S、FMV启动子、NOS终止子的检测 | 第54-56页 |
| ·转基因植物中标记基因NPTⅡ的检测 | 第56-57页 |
| ·转基因植物中PAT、EPSPS、CrylA(b))目标基因的检测 | 第57-59页 |
| ·灵敏度试验 | 第59页 |
| ·PCR产物的回收测序(验证实验) | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| ·植物基因组DNA的提取及质量控制 | 第60页 |
| ·设立阳性对照与阴性对照、内参照的必要性 | 第60-61页 |
| ·防止污染的措施 | 第61页 |
| ·检测灵敏度的重要性 | 第61-62页 |
| ·外源基因筛选检测与鉴定检测的确定 | 第62页 |
| ·对PCR定性检测体系的评价 | 第62-63页 |
| 第三章 转基因植物外源基因荧光PCR检测方法的建立 | 第63-88页 |
| 1 供试材料 | 第63-65页 |
| ·转基因标准物质 | 第63页 |
| ·植物样品 | 第63页 |
| ·宿主菌、供试载体及培养基 | 第63页 |
| ·供试酶类及所用试剂盒 | 第63页 |
| ·供试DNA分子量标准 | 第63页 |
| ·仪器 | 第63-64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第64页 |
| ·耗材 | 第64-65页 |
| 2 方法 | 第65-72页 |
| ·荧光PCR检测的靶基因 | 第65页 |
| ·引物及荧光探针的设计 | 第65-66页 |
| ·模板DNA的提取 | 第66-67页 |
| ·所提取DNA的纯度和浓度测定 | 第67页 |
| ·荧光PCR检测的反应体系及反应条件 | 第67页 |
| ·摸板DNA提取的质量检测 | 第67页 |
| ·荧光PCR检测的可重复性 | 第67页 |
| ·荧光PCR检测的相对灵敏度检测 | 第67页 |
| ·荧光定性PCR检测 | 第67页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第67-70页 |
| ·PCR产物的确认 | 第70-72页 |
| ·PCR产物电泳分离 | 第70页 |
| ·PCR产物的回收 | 第70页 |
| ·PCR产物与载体的连接 | 第70-71页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第71页 |
| (1) TSS转化法 | 第71页 |
| (2) CaCl_2转化法 | 第71页 |
| ·克隆的筛选 | 第71-72页 |
| (1) 裂解细菌直接PCR筛选 | 第71页 |
| (2) 质粒DNA的提取 | 第71-72页 |
| ·插入片段的序列测定 | 第72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-84页 |
| ·荧光PCR检测DNA提取质量结果分析 | 第72-73页 |
| ·荧光PCR检测的重复性实验结果分析 | 第73-74页 |
| ·荧光PCR检测的相对灵敏度实验结果分析 | 第74页 |
| ·荧光PCR定性检测结果分析 | 第74-77页 |
| ·转基因大豆荧光定量PCR检测结果分析 | 第77-79页 |
| ·转基因玉米荧光定量PCR检测结果分析 | 第79-81页 |
| ·PCR产物克隆的结果分析 | 第81-82页 |
| ·PCR产物序列测定结果分析 | 第82-83页 |
| ·FMV、PAT基因克隆测序及结果分析 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-88页 |
| ·关于荧光探针的讨论 | 第84-85页 |
| ·影响探针检测灵敏度的几个可能因素 | 第85-86页 |
| ·UNG酶及实验室的PCR产物污染问题 | 第86-87页 |
| ·荧光PCR检测的方法的评价 | 第87-88页 |
| 第四章 转基因植物外源基因整合位点的研究 | 第88-99页 |
| 1 材料 | 第88页 |
| ·植物材料 | 第88页 |
| ·宿主菌、供试载体及培养基 | 第88页 |
| ·供试酶类及所用试剂盒 | 第88页 |
| ·供试DNA分子量标准 | 第88页 |
| ·仪器 | 第88页 |
| ·试剂 | 第88页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第88页 |
| ·耗材 | 第88页 |
| 2 方法 | 第88-91页 |
| ·植物基因组与转基因连接区的选择 | 第88-89页 |
| ·引物及探针的设计与合成 | 第89页 |
| ·DNA的提取 | 第89页 |
| ·模板DNA提取浓度和纯度的检测 | 第89页 |
| ·限制性酶切 | 第89页 |
| ·内切DNA提取 | 第89-90页 |
| ·酶切效果检测 | 第90页 |
| ·T4DNA酶连接 | 第90页 |
| ·第二次限制酶内切 | 第90页 |
| ·内切DNA提取 | 第90页 |
| ·反向PCR反应 | 第90-91页 |
| ·PCR产物的确认 | 第91页 |
| ·荧光定量PCR检测与灵敏度分析 | 第91页 |
| ·华番1号特异性DNA片段的验证实验 | 第91页 |
| 3 结果与分析 | 第91-97页 |
| ·反向PCR与荧光定量PCR反应体系的优化 | 第91-94页 |
| ·华番1号外基因整合位点DNA特异序列检测结果 | 第94-95页 |
| ·华番1号整合位点品种特异性DNA片段的验证 | 第95-96页 |
| ·荧光定量PCR灵敏度实验 | 第96-97页 |
| 4 讨论 | 第97-99页 |
| ·荧光PCR技术检测BioSCien整合位点的特异性 | 第97页 |
| ·利用整合位点检测转基因作物可以提高荧光PCR的灵敏度 | 第97-99页 |
| 第五章 结论 | 第99-101页 |
| 1 转基因植物外源基因PCR检测方法的建立 | 第99页 |
| 2 转基因植物外源基因荧光PCR检测方法的建立 | 第99-100页 |
| 3 转基因植物外源基因整合位点荧光PCR检测方法的建立 | 第100-101页 |
| 第六章 应用 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 附录A1 | 第112-113页 |
| 附录A2 | 第113-114页 |
| 附录A3 | 第114-115页 |
| 附件B | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 作者简历 | 第117-118页 |
| 成果及论文目录 | 第118页 |
