| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 脂肪酸结合蛋白研究进展 | 第10-17页 |
| 1 FABP类型、分布及结构特点 | 第10-13页 |
| ·H-FABP组织分布与结构特点 | 第11-12页 |
| ·A-FABP组织分布与结构特点 | 第12页 |
| ·L-FABP的组织分布与结构特点 | 第12页 |
| ·脂肪酸结合蛋白的基因 | 第12-13页 |
| 2 脂肪酸结合蛋白的生物学功能 | 第13-15页 |
| ·FABP与体内脂肪酸的转运 | 第13-14页 |
| ·FABP对脂肪酸摄取的影响 | 第14-15页 |
| 3 FABP调节脂肪酸代谢机制 | 第15-16页 |
| ·调节细胞内脂肪酸的浓度,调控多种细胞内的生化反应过程 | 第15页 |
| ·FABP与脂肪酸代谢酶 | 第15页 |
| ·FABP基因的脂肪酸调控 | 第15-16页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 草鱼肝脏型脂肪酸结合蛋白基因CDNA全长克隆、组织表达及序列分析 | 第17-40页 |
| 1 材料与方法 | 第17-25页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·实验动物与菌株 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-25页 |
| ·动物材料处理 | 第19页 |
| ·总RNA的提取 | 第19页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第19页 |
| ·SMART cDNA的合成 | 第19-22页 |
| ·草鱼Liver fatty-acid binding protein(FABP)cDNA片段的获得 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的鉴定和胶回收 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·目的片断的连接和转化 | 第23-24页 |
| ·序列分析 | 第24页 |
| ·系统发育树的构建 | 第24-25页 |
| ·L-FABP基因的RT-PCR分析 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-37页 |
| ·草鱼肝胰脏总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·草鱼L-FABP基因cDNA全长序列拼接及序列分析 | 第26-36页 |
| ·草鱼L-FABP基因cDNA全长的获得 | 第26-29页 |
| ·L-FABP基因编码氨基酸序列结构分析及信号肽预测 | 第29-30页 |
| ·草鱼L-FABP氨基酸序列的跨膜结构、二硫键和三级结构预测 | 第30-32页 |
| ·草鱼L-FABP氨基酸序列与其他物种的同源性比较 | 第32-34页 |
| ·系统发育分析 | 第34-36页 |
| ·草鱼L-FABP基因的组织差异表达分析 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-40页 |
| ·肝脏型脂肪酸结合蛋白基因序列的基本特征 | 第37-38页 |
| ·草鱼L-FABP基因在不同组织中的表达 | 第38-39页 |
| ·RACE扩增L-FABP全长基因 | 第39-40页 |
| 第三章 草鱼L-FABP基因的原核表达 | 第40-50页 |
| 1 材料与方法 | 第40-45页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·菌种及载体 | 第40-41页 |
| ·酶制剂及化学试剂 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·原核表达载体的构建及质粒重组 | 第41-44页 |
| ·草鱼肝脏总RNA提取及cDNA第一链的合成 | 第41页 |
| ·草鱼L-FABP基因开放阅读框(Opening Reading Fram)区域的扩增及胶回收 | 第41-42页 |
| ·原核表达载体质粒DNA的小量提取 | 第42-43页 |
| ·带粘性末端L-FABP基因及载体的制备 | 第43-44页 |
| ·L-FABP基因与原核表达载体的连接与转化 | 第44页 |
| ·重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE鉴定 | 第44-45页 |
| 2 实验结果 | 第45-48页 |
| ·草鱼L-FABP基因开放阅读框(OPEN READING FRAME,ORF)扩增 | 第45-46页 |
| ·草鱼L-FABP基因重组表达质粒构建和鉴定 | 第46页 |
| ·草鱼L-FABP基因开放阅读框(OPEN READING FRAME,ORF)片段测序鉴定 | 第46-47页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| ·表达载体的选择、诱导条件及重组蛋白的表达形式 | 第48页 |
| ·脂肪酸结合蛋白原核表达载体构建及融合蛋白表达 | 第48-49页 |
| ·脂肪酸结合蛋白原核表达研究展望 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-61页 |
| 附录 | 第61-67页 |
| 1.各种缓冲液及培养基的配置方法 | 第61-62页 |
| 2.测序图谱(部分) | 第62-66页 |
| 3.GENE BANK提交的肝脏型脂肪酸结合蛋白cDNA全长序列 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
