| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-51页 |
| ·植物胚胎发育过程 | 第16-21页 |
| ·合子极性的建立 | 第16-18页 |
| ·顶细胞的发育及胚体的形成 | 第18-20页 |
| ·基细胞的发育 | 第20-21页 |
| ·植物胚胎发育的分子调控 | 第21-38页 |
| ·胚胎发生早期极性建立过程中的基因表达调控 | 第21-23页 |
| ·生长素的流动与胚胎轴向结构的形成 | 第23-26页 |
| ·胚胎区域形态建立过程中的基因表达调控 | 第26-27页 |
| ·胚的顶部区域的形态建成 | 第27-30页 |
| ·定义中心和外围区域的基因 | 第27-28页 |
| ·左右对称性的转变及子叶的出现 | 第28-30页 |
| ·苗端分生组织的胚性起始 | 第30-32页 |
| ·胚的基部区域的形态建成和根端分生组织的起始 | 第32-38页 |
| ·胚轴的形成 | 第32-33页 |
| ·胚根的形成和根的分生组织的起始 | 第33-38页 |
| ·植物体细胞胚胎发生及研究进展 | 第38-42页 |
| ·植物体细胞胚胎发生的意义 | 第38-39页 |
| ·植物体细胞胚胎发生的研究基础 | 第39-40页 |
| ·拟南芥中已经建立的体细胞胚胎发生系统 | 第40-42页 |
| ·压力诱导体细胞胚胎发生系统 | 第40-41页 |
| ·以未成熟合子胚做外植体诱导体细胞胚胎发生 | 第41-42页 |
| ·植物体细胞胚胎发生的细胞生物学研究 | 第42-43页 |
| ·体细胞胚胎发生的起源 | 第42页 |
| ·体细胞胚胎极性的建立 | 第42-43页 |
| ·激素信号转导与体细胞胚胎发生 | 第43-45页 |
| ·体细胞胚胎发生与胚发育基因的表达 | 第45-49页 |
| ·自培养的胚性组织中分离得到的基因和蛋白 | 第45-47页 |
| ·利用胚胎缺陷型突变体分离得到的基因 | 第47-49页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第49-51页 |
| 2 材料与方法 | 第51-72页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第51页 |
| ·菌株和质粒 | 第51页 |
| ·酶及生化试剂 | 第51-52页 |
| ·PCR 引物 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-72页 |
| ·拟南芥组织培养 | 第52-53页 |
| ·胚性愈伤组织的培养 | 第52页 |
| ·体细胞胚的诱导 | 第52-53页 |
| ·表达载体的构建 | 第53-58页 |
| ·植物组织总RNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第54页 |
| ·植物基因组DNA 的提取及纯化 | 第54-55页 |
| ·PCR 扩增 | 第55页 |
| ·连接反应 | 第55-56页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备、转化及碱法小量质粒DNA 的提取 | 第56页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第56页 |
| ·DNA 序列测定 | 第56页 |
| ·诱导型anti-WUS 表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·诱导型anti-PIN1 表达载体的构建 | 第57页 |
| ·WUS::GUS 表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第58-60页 |
| ·根癌农杆菌GV3101 感受态细胞的制备与转化 | 第58页 |
| ·拟南芥的栽培、转化及转基因植株分析 | 第58-60页 |
| ·半定量RT-PCR 分析 | 第60-62页 |
| ·胚胎发育过程中的基因在不同组织中的表达分析 | 第60-61页 |
| ·生长素信号转导途径的基因在不同组织中的表达分析 | 第61-62页 |
| ·原位杂交分析 | 第62-68页 |
| ·材料的固定 | 第62页 |
| ·材料的包埋 | 第62页 |
| ·切片 | 第62页 |
| ·探针标记 | 第62-66页 |
| ·脱蜡、消化、乙酰化和杂交 | 第66-67页 |
| ·洗片 | 第67页 |
| ·检测 | 第67-68页 |
| ·GUS 染色分析 | 第68-69页 |
| ·GUS 染色后的石蜡切片 | 第69页 |
| ·取材固定 | 第69页 |
| ·脱水、透明、浸蜡、包埋 | 第69页 |
| ·钌红染色 | 第69页 |
| ·扫描电镜观察 | 第69-70页 |
| ·共聚焦显微镜观察和图像处理 | 第70页 |
| ·microRNA 芯片分析 | 第70-72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-92页 |
| ·体细胞胚胎发生系统的建立 | 第72-74页 |
| ·体细胞胚的形态学观察 | 第72-73页 |
| ·体细胞胚的扫描电镜观察 | 第73-74页 |
| ·胚胎发育过程中基因的表达分析 | 第74-77页 |
| ·胚胎发育过程中基因的半定量RT-PCR 分析 | 第74-75页 |
| ·胚胎特征基因LEC2 在体细胞胚发生过程中的表达分析 | 第75-77页 |
| ·干细胞决定基因在体细胞胚诱导过程中的表达分析 | 第77-83页 |
| ·干细胞标记基因CLV3 的表达模式分析 | 第77-78页 |
| ·组织中心标记基因WUS 的表达模式分析 | 第78-79页 |
| ·CLV3 和WUS 基因在愈伤组织中的表达共定位 | 第79-80页 |
| ·WUS 基因反义表达的作用 | 第80-81页 |
| ·生长素运输抑制剂对WUS 基因表达模式的影响 | 第81-83页 |
| ·生长素极性运输及分布 | 第83-87页 |
| ·生长素的极性分布 | 第83-84页 |
| ·PIN1 蛋白的极性定位 | 第84-86页 |
| ·PIN1 蛋白与WUS 基因的共定位 | 第86-87页 |
| ·不同浓度生长素的诱导作用 | 第87-91页 |
| ·形态学观察 | 第87-89页 |
| ·生长素的极性分布及WUS 基因的表达 | 第89-91页 |
| ·MICRORNA 与体细胞胚胎发生 | 第91-92页 |
| 4 讨论 | 第92-97页 |
| ·苗端分生组织的重新建成是体细胞胚发生的前提 | 第92-93页 |
| ·组织中心的形成对于体细胞胚的诱导是必需的 | 第93-94页 |
| ·生长素极性运输诱导体细胞胚胎发生 | 第94-95页 |
| ·WUS 的表达需要一定水平的外源生长素诱导 | 第95页 |
| ·生长素调节体细胞胚胎发生的初步模型的提出 | 第95-97页 |
| 5 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-117页 |
| 附录 | 第117-126页 |
| 攻读学位期间完成的学术论文 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
