| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 插图清单 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| ·ALT肿瘤 | 第11-13页 |
| ·DNA甲基化与肿瘤 | 第13-15页 |
| ·p16~(Ink4a)基因甲基化与癌症 | 第15-17页 |
| ·5-Aza-CdR去甲基化与肿瘤治疗 | 第17-18页 |
| ·普洱茶及黄杨类化合物简介 | 第18-20页 |
| ·本研究意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-41页 |
| ·主要实验试剂和仪器 | 第21-23页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·实验流程图 | 第23页 |
| ·试剂配置方法 | 第23-27页 |
| ·实验方法 | 第27-41页 |
| ·小鼠ALT肿瘤的获得及其p16~(Ink4a)基因甲基化状态的测定 | 第27-28页 |
| ·小鼠ALT肿瘤细胞及WT(野生型)细胞的培养 | 第28页 |
| ·小鼠ALT肿瘤细胞及WT(野生型)细胞的复苏和冻存和传代 | 第28-30页 |
| ·细胞计数 | 第30页 |
| ·不同浓度的普洱茶、5-Aza-CdR及黄杨类化合物KBAO2等药物处理ALT肿瘤细胞及WT细胞后,观察细胞形态 | 第30页 |
| ·结晶紫染色实验检测普洱茶对ALT肿瘤细胞及WT细胞的抑制情况 | 第30-31页 |
| ·MTT实验检测黄杨类化合物KBAO2对ALT肿瘤细胞及WT细胞的抑制情况 | 第31页 |
| ·用药物处理细胞一段时间后收集细胞沉淀 | 第31-32页 |
| ·提取细胞沉淀中的DNA及DNA浓度和纯度的测定 | 第32页 |
| ·基因组DNA的亚硫酸盐修饰和BSP(bisuLfate sequencingPCR)测序分析 | 第32-33页 |
| ·TA克隆的连接与转化 | 第33-34页 |
| ·菌落PCR与测序 | 第34页 |
| ·总RNA提取及RNA酶污染的预防 | 第34-35页 |
| ·RNA浓度和纯度的测定 | 第35页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| ·RT-PCR(real-time PCR)扩增 | 第35-36页 |
| ·Western blot检测普洱茶、5-Aza-CdR及黄杨类化合物KBAO2等药物处理细胞后p16~(Ink4a)的蛋白表达水平 | 第36-38页 |
| ·普洱茶、5-Aza-CdR及黄杨类化合物KBAO2等药物处理肿瘤细胞后提取细胞核蛋白 | 第38-39页 |
| ·普洱茶及5-Aza-CdR等药物处理肿瘤细胞后检测其DNMT活力 | 第39-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-55页 |
| ·ALT肿瘤细胞p16~(Ink4a)基因甲基化状态 | 第41-43页 |
| ·不同浓度的普洱茶、黄杨类化合物KBAO2及5-Aza-CdR等药物抗ALT肿瘤效果 | 第43-47页 |
| ·结晶紫染色实验检测普洱茶对ALT肿瘤细胞抑制 | 第47-48页 |
| ·MTT实验检测黄杨类化合物KBAO2对ALT肿瘤细胞及WT细胞的抑制情况 | 第48-49页 |
| ·普洱茶及5-Aza-CdR等药物对ALT肿瘤细胞p16~(Ink4a)基因启动子区附近甲基化模式的影响 | 第49-50页 |
| ·普洱茶、5-Aza-CdR及黄杨类化合物等药物对ALT肿瘤细胞p16~(Ink4a)基因的mRNA转录水平的影响 | 第50-52页 |
| ·普洱茶、5-Aza-CdR及黄杨类化合物等药物对ALT肿瘤细胞p16~(Ink4a)基因蛋白表达的影响 | 第52-53页 |
| ·普洱茶、5-Aza-CdR及黄杨类化合物KBA02等药物对ALT肿瘤细胞DNMTs活力的影响 | 第53-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-59页 |
| 第五章 总结和展望 | 第59-60页 |
| ·总结 | 第59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第67页 |
