| 摘要 | 第1-8页 |
| Summary | 第8-14页 |
| 第一部分 文献综述:体细胞克隆的表观遗传研究进展 | 第14-30页 |
| 一、供体细胞的选择 | 第15-18页 |
| 1 不同类型的供体细胞对重编程的影响 | 第15-16页 |
| 2 不同周期的供体细胞对重编程的影响 | 第16页 |
| 3 不同代数的供体细胞对重编程的影响 | 第16-17页 |
| 4 不同年龄的供体细胞对重编程的影响 | 第17页 |
| 5 不同物种的供体细胞对重编程的影响 | 第17-18页 |
| 二、供体细胞的处理 | 第18-20页 |
| 1 供体细胞的冷冻保存 | 第18页 |
| 2 供体细胞的血清饥饿处理及离子霉素激活 | 第18-19页 |
| 3 利用促重编程试剂处理供体细胞 | 第19-20页 |
| 三、动物胚胎的表观遗传修饰 | 第20-30页 |
| 1 DNA 甲基化与去甲基化 | 第21-22页 |
| ·DNA 甲基化 | 第21页 |
| ·DNA 甲基化对胚胎发育情况的影响 | 第21-22页 |
| ·DNA 去甲基化 | 第22页 |
| 2 组蛋白修饰作用 | 第22-26页 |
| ·组蛋白甲基化 | 第23页 |
| ·组蛋白甲基化与DNA 甲基化的关系 | 第23-24页 |
| ·组蛋白乙酰化作用 | 第24页 |
| ·DNA 甲基化与组蛋白乙酰化关系 | 第24-26页 |
| ·组蛋白磷酸化研究现状及发展动态 | 第26页 |
| 3 X 染色体失活的研究现状及发展动态 | 第26-27页 |
| 4 基因组印迹研究现状及发展动态 | 第27-28页 |
| 5 端粒维持的研究现状及发展动态 | 第28-30页 |
| 第二部分 试验部分 | 第30-62页 |
| 试验一、TSA 对绵羊卵丘/颗粒细胞和成纤维细胞的影响 | 第30-42页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| ·试验材料 | 第31-33页 |
| ·动物材料来源 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第32-33页 |
| 2 试验方法 | 第33-35页 |
| ·供体细胞系的建立 | 第33-34页 |
| ·绵羊卵丘/颗粒细胞系的建立 | 第33-34页 |
| ·滩羊成纤维细胞的复苏与培养 | 第34页 |
| ·不同浓度TSA 对供体细胞形态与活率的影响 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光法检测不同浓度TSA 对供体细胞乙酰化水平的影响 | 第34-35页 |
| ·数据统计 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-40页 |
| ·不同浓度TSA 对绵羊卵丘/颗粒细胞和成纤维细胞形态的影响 | 第35-36页 |
| ·不同浓度TSA 对绵羊卵丘/颗粒细胞和成纤维细胞活率的影响 | 第36-37页 |
| ·不同浓度TSA 对绵羊卵丘/颗粒细胞和成纤维细胞乙酰化的影响 | 第37-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 试验二、 供体细胞的不同处理对其重编程能力的影响 | 第42-56页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| ·试验材料 | 第42-44页 |
| ·动物材料来源 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·试剂的配制 | 第43页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第43-44页 |
| 2 试验方法 | 第44-46页 |
| ·卵母细胞的成熟培养 | 第44页 |
| ·供体细胞的准备 | 第44页 |
| ·核移植 | 第44页 |
| ·核移植胚的激活及培养 | 第44-45页 |
| ·试验设计 | 第45-46页 |
| ·细胞形态与活率检测 | 第45页 |
| ·乙酰化抗体荧光标记 | 第45页 |
| ·周期检测 | 第45-46页 |
| ·克隆胚胎乙酰化水平检测 | 第46页 |
| ·数据统计 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-54页 |
| ·不同处理方法对卵丘/颗粒细胞和成纤维细胞形态影响 | 第46-47页 |
| ·TSA，ROS，血清饥饿，接触抑制对颗粒细胞乙酰化水平的影响 | 第47-50页 |
| ·不同处理方法对卵丘/颗粒和成纤维细胞周期的影响 | 第50-51页 |
| ·不同处理方法对克隆胚发育水平的影响 | 第51-52页 |
| ·供体细胞经不同处理的激活前重构胚乙酰化水平 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 试验三、TSA 对早期克隆胚胎乙酰化变化模式的影响 | 第56-62页 |
| 1 材料 | 第56页 |
| ·主要仪器及器具 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·试剂的配制 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-58页 |
| ·供体细胞的准备方法 | 第56-57页 |
| ·受体卵母细胞的准备方法 | 第57页 |
| ·卵母细胞体外受精及培养 | 第57页 |
| ·核移植方法 | 第57页 |
| ·核移植胚的激活及培养 | 第57页 |
| ·试验设计 | 第57页 |
| ·不同胚胎发育水平的比较 | 第57页 |
| ·不同胚胎乙酰化水平的比较 | 第57页 |
| ·数据分析 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-60页 |
| ·不同胚胎的体外发育水平 | 第58页 |
| ·体外受精胚胎和克隆胚胎的各个阶段组蛋白乙酰化变化模式 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 第三部分 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
| 导师简介 | 第72-73页 |
