| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 RNA 沉默及其应用的研究进展 | 第10-19页 |
| 1 引言 | 第10页 |
| 2 RNA 沉默的分类 | 第10-13页 |
| ·转录水平的基因沉默(TGS) | 第11页 |
| ·转录后的基因沉默(PTGS) | 第11-13页 |
| 3 RNA 沉默机制 | 第13-15页 |
| 4 RNA 沉默的信号 | 第15-16页 |
| ·可能的信号分子 | 第15页 |
| ·信号分子传导的特点 | 第15-16页 |
| 5 RNA 沉默的病毒抑制子 | 第16-18页 |
| ·植物病毒抑制子干扰基因沉默的机制 | 第16页 |
| ·植物病毒抑制子的分类 | 第16-17页 |
| ·病毒抑制子的鉴定方法 | 第17页 |
| ·病毒抑制子需要解决的问题 | 第17-18页 |
| 6 RNA 沉默的应用展望 | 第18-19页 |
| 第二章 TuMV HC-Pro 基因反向重复植物表达载体的构建 | 第19-27页 |
| 1 材料 | 第19页 |
| ·质粒与菌种 | 第19页 |
| ·酶与化学试剂 | 第19页 |
| ·抗生素 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-24页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第19-20页 |
| ·目的基因的扩增 | 第20-22页 |
| ·HC-Pro 基因反向重复植物表达载体的构建 | 第22-24页 |
| ·三亲交配法将 pCambia1301-TuMV HC-Pro 导入农杆菌 EHA105 | 第24页 |
| 3 结果与讨论 | 第24-27页 |
| ·HC-Pro 基因的克隆和反向重复植物表达载体的构建 | 第24-27页 |
| 第三章 反向重复 TuMV HC-Pro 基因转化烟草的研究 | 第27-43页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·培养基与抗生素 | 第27-28页 |
| ·抗血清与毒源 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-32页 |
| ·反向重复 HC-Pro 基因转化烟草 | 第28-29页 |
| ·转基因烟草植株对 TuMV 的抗性分析 | 第29页 |
| ·转基因烟草的分子生物学检测 | 第29-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-41页 |
| ·烟草再生体系 Hyg 筛选压的确定 | 第32-33页 |
| ·烟草再生体系 Kan 筛选压的确定 | 第33页 |
| ·转基因烟草植株的获得 | 第33-34页 |
| ·转基因烟草植株对 TuMV 的抗性分析 | 第34-38页 |
| ·转基因烟草植株的分子生物学检测 | 第38-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 反向重复 TuMV HC-Pro 基因转化拟南芥的研究 | 第43-49页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·质粒和菌株 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-44页 |
| ·拟南芥的播种 | 第43页 |
| ·拟南芥的转化 | 第43-44页 |
| ·转基因拟南芥 Hyg 筛选压的确定 | 第44页 |
| ·转基因拟南芥植株的 PCR 检测 | 第44页 |
| ·转基因拟南芥植株的 RT-PCR 检测 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-48页 |
| ·拟南芥 Hyg 筛选压的确定 | 第44-47页 |
| ·转基因拟南芥的分子生物学检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 雪里蕻高效再生体系的构建 | 第49-56页 |
| 1 材料 | 第49页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-50页 |
| ·无菌苗的获得 | 第49页 |
| ·不定芽的诱导 | 第49-50页 |
| ·不定根的诱导 | 第50页 |
| ·组培苗的移栽 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-54页 |
| ·不定芽的诱导 | 第50-53页 |
| ·不定根的诱导 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 反向重复 TuMV HC-Pro 基因转化雪里蕻的研究 | 第56-69页 |
| 1 材料 | 第56页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·培养基与抗生素 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-58页 |
| ·雪里蕻的组织培养 | 第56-57页 |
| ·外植体 Hyg 筛选压的确定 | 第57页 |
| ·雪里蕻外植体的遗传转化 | 第57页 |
| ·抑制褐化实验 | 第57-58页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)浓度的确定 | 第58页 |
| ·转基因雪里蕻植株的 PCR 检测 | 第58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-67页 |
| ·不同植物生长调节剂配比对不定芽分化的影响 | 第58页 |
| ·外植体预培养天数的确定 | 第58-59页 |
| ·外植体 Hyg 筛选压的确定 | 第59-61页 |
| ·菌液浓度和 Car 浓度的确定 | 第61-62页 |
| ·农杆菌侵染时间的确定 | 第62-63页 |
| ·暗培养时间的确定 | 第63-64页 |
| ·预筛选时间的确定 | 第64页 |
| ·抑制褐化实验 | 第64-65页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)浓度的确定 | 第65-66页 |
| ·转基因雪里蕻植株的获得 | 第66页 |
| ·转基因雪里蕻植株的 PCR 检测 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录 | 第77-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
