| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第13-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-42页 |
| ·副猪嗜血杆菌病 | 第15-26页 |
| ·病原学 | 第15-17页 |
| ·血清与基因型 | 第17-19页 |
| ·临床症状 | 第19-20页 |
| ·病理变化 | 第20-21页 |
| ·致病机理及毒力因子 | 第21-24页 |
| ·免疫与疫苗 | 第24-26页 |
| ·SCOTS技术概述 | 第26-35页 |
| ·多种差异显示技术的比较 | 第26-30页 |
| ·SCOTS技术原理 | 第30-31页 |
| ·SCOTS技术的应用 | 第31-34页 |
| ·SCOTS技术的优缺点 | 第34-35页 |
| ·反向疫苗学研究 | 第35-37页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第37-42页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第37-39页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第39-40页 |
| ·酵母双杂交系统的优缺点 | 第40-42页 |
| 第2章 副猪嗜血杆菌感染和应激相关基因的筛选 | 第42-85页 |
| ·前言 | 第42-43页 |
| ·材料与方法 | 第43-56页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第43-44页 |
| ·培养基,抗生素及铁离子螯合剂的配制 | 第44页 |
| ·主要缓冲液 | 第44-45页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第45-48页 |
| ·缺铁、高温及正常体外培养条件 | 第48页 |
| ·细菌计数 | 第48页 |
| ·实验动物的分组与感染 | 第48页 |
| ·菌株的分离和鉴定 | 第48-49页 |
| ·rDNA基因的克隆 | 第49-51页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第51-52页 |
| ·基因组DNA和rDNA基因克隆质粒的超声波处理 | 第52页 |
| ·基因组DNA的光敏生物素酰化 | 第52页 |
| ·RNA提取及双链cDNA的合成及扩增 | 第52-53页 |
| ·cDNA的SCOTS标准化 | 第53-54页 |
| ·cDNA的SCOTS富集 | 第54页 |
| ·SCOTS文库的克隆 | 第54-55页 |
| ·反向Southern斑点杂交技术筛选阳性克隆 | 第55页 |
| ·测序检测生物信息学分析,对筛选到的基因进行功能注释 | 第55页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-75页 |
| ·副猪嗜血杆菌rDNA重组载体的验证 | 第56-57页 |
| ·副猪嗜血杆菌肺组织感染相关的基因 | 第57-66页 |
| ·3 副猪嗜血杆菌铁应激相关的基因 | 第66-71页 |
| ·副猪嗜血杆菌高温应激相关的基因 | 第71-75页 |
| ·讨论 | 第75-85页 |
| ·副猪嗜血杆菌肺组织感染相关的基因 | 第75-78页 |
| ·副猪嗜血杆菌铁应激相关的基因 | 第78-81页 |
| ·副猪嗜血杆菌高温应激相关的基因 | 第81-85页 |
| 第3章 副猪嗜血杆菌感染和应激相关蛋白的免疫原性的研究 | 第85-103页 |
| ·前言 | 第85页 |
| ·材料和方法 | 第85-95页 |
| ·主要试剂 | 第85-86页 |
| ·主要缓冲液 | 第86-87页 |
| ·预测候选抗原蛋白的信号肽 | 第87页 |
| ·菌株和培养条件,血清,质粒和引物 | 第87-89页 |
| ·实验动物 | 第89页 |
| ·候选抗原基因在不同血清型的菌株中的分布 | 第89-90页 |
| ·候选抗原基因的克隆表达以及纯化 | 第90-91页 |
| ·SDS-PAGE电泳与Western blot | 第91-93页 |
| ·流式细胞术分析蛋白的表面分布 | 第93页 |
| ·免疫保护性抗原对细胞的粘附作用 | 第93页 |
| ·动物实验 | 第93-95页 |
| ·结果与分析 | 第95-101页 |
| ·免疫原性蛋白的基因在其它各类血清型中的分布情况检测 | 第95页 |
| ·免疫原性蛋白的重组表达纯化 | 第95-97页 |
| ·流式细胞术分析蛋白的表面分布 | 第97页 |
| ·免疫保护性抗原对细胞的粘附作用 | 第97-99页 |
| ·仔猪抗体水平评价 | 第99页 |
| ·蛋白对仔猪免疫效力实验 | 第99-101页 |
| ·讨论 | 第101-103页 |
| ·抗原蛋白特性分析 | 第101-102页 |
| ·保护性抗原的筛选鉴定 | 第102-103页 |
| 第4章 副猪嗜血杆菌感染和应激相关蛋白与宿主蛋白质的相互作用 | 第103-128页 |
| ·前言 | 第103-104页 |
| ·材料 | 第104-110页 |
| ·菌株,质粒,引物及文库 | 第104-108页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第108-110页 |
| ·方法 | 第110-115页 |
| ·重组载体的构建 | 第110页 |
| ·酵母菌的高效转化 | 第110页 |
| ·检测诱饵质粒的自激活 | 第110-111页 |
| ·Mating筛选阳性克隆 | 第111页 |
| ·β-半乳糖苷酶检测lacZ报告基因的表达 | 第111页 |
| ·阳性酵母菌落所含质粒的提取 | 第111页 |
| ·Prey质粒的分离 | 第111-112页 |
| ·阳性酵母菌落的回转实验验证 | 第112页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第112页 |
| ·诱饵蛋白的原核表达载体的构建 | 第112-113页 |
| ·候选阳性克隆的原核表达载体的构建 | 第113页 |
| ·蛋白质表达纯化以及SDS-PAGE和Western blot验证 | 第113-114页 |
| ·Pull-down体外验证实验 | 第114页 |
| ·诱饵蛋白的真核表达载体的构建 | 第114页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第114-115页 |
| ·CFDA-SE细胞增殖与示踪检测试剂盒的检测 | 第115页 |
| ·结果与分析 | 第115-123页 |
| ·诱饵重组载体的构建和鉴定 | 第115-116页 |
| ·诱饵蛋白功能域预测 | 第116-117页 |
| ·诱饵质粒自激活的验证 | 第117页 |
| ·测序和BLAST分析 | 第117-118页 |
| ·阳性酵母菌落的回转实验验证 | 第118页 |
| ·Prey蛋白功能域预测 | 第118-119页 |
| ·诱饵蛋白原核重组载体的构建和鉴定 | 第119页 |
| ·Prey蛋白原核重组载体的构建和鉴定 | 第119-120页 |
| ·蛋白质表达纯化以及SDS-PAGE和Western blot验证 | 第120-121页 |
| ·PilA,ArcB和SiaB蛋白与宿主蛋白作用方式的预测 | 第121-122页 |
| ·Pull-down体外验证实验 | 第122页 |
| ·诱饵蛋白真核重组载体的构建和鉴定 | 第122-123页 |
| ·CFDA-SE细胞增殖与示踪检测试剂盒的检测 | 第123页 |
| ·讨论 | 第123-128页 |
| ·酵母双杂交技术筛选副猪嗜血杆菌与宿主发生互作的蛋白 | 第123-124页 |
| ·PilA,ArcB和SiaB与致病性的关系 | 第124-125页 |
| ·酵母双杂交系统的假阳性 | 第125页 |
| ·Pull-down体外验证实验 | 第125页 |
| ·PilA与宿主细胞增殖的关系 | 第125-126页 |
| ·ArcB与副猪嗜血杆菌与宿主免疫逃避的关系 | 第126页 |
| ·SiaB与副猪嗜血杆菌与宿主免疫逃避的关系 | 第126-128页 |
| 结论与展望 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 附录 | 第151页 |
