| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 1.文献综述 | 第14-45页 |
| ·巴贝斯虫病的概述 | 第14-22页 |
| ·巴贝斯虫的分类 | 第14-16页 |
| ·巴贝斯虫的传播媒介及生活史 | 第16-18页 |
| ·宿主免疫应答 | 第18-21页 |
| ·巴贝斯虫的流行病学 | 第21-22页 |
| ·牛的巴贝斯虫病的研究进展 | 第22-39页 |
| ·牛的巴贝斯虫的种类 | 第22-24页 |
| ·基因组特征 | 第24-25页 |
| ·疫苗候选抗原的研究 | 第25-30页 |
| ·牛的巴贝斯虫的诊断 | 第30-34页 |
| ·免疫与防治 | 第34-39页 |
| ·东方巴贝斯虫病的研究进展 | 第39-45页 |
| ·形态学特点及传播媒介蜱 | 第39-40页 |
| ·18S rRNA的分子生物学进化分析 | 第40-41页 |
| ·半巢式PCR建立及分子流行病学调查 | 第41-42页 |
| ·cDNA文库的构建及EST分析 | 第42-45页 |
| 2.研究的目的意义 | 第45-46页 |
| 3 材料与方法 | 第46-66页 |
| ·试验材料 | 第46-52页 |
| ·细胞、抗原、试验动物、血清、文库和载体 | 第46-48页 |
| ·试剂及仪器 | 第48-49页 |
| ·试剂的配制 | 第49-52页 |
| ·试验方法 | 第52-66页 |
| ·东方巴贝斯虫裂殖子全抗原的提取 | 第52-53页 |
| ·动物免疫 | 第53页 |
| ·sp2/0骨髓瘤细胞的活化 | 第53页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第53-56页 |
| ·sp2/0瘤细胞的制备 | 第53-54页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第54页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第54页 |
| ·免疫脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞的融合 | 第54-55页 |
| ·间接ELISA方法检测杂交瘤细胞上清 | 第55页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法) | 第55-56页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第56页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第56页 |
| ·抗血清的预处理 | 第56-57页 |
| ·噬菌体的扩增 | 第57页 |
| ·cDNA文库的筛选 | 第57-58页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·阳性克隆中插入片段DNA核苷酸序列测定及同源性分析 | 第59-60页 |
| ·引物设计 | 第60页 |
| ·东方巴贝斯虫BoP29基因片段的扩增 | 第60页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第60-61页 |
| ·重组表达质粒的构建及目的外源DNA的序列测定 | 第61页 |
| ·诱导表达 | 第61页 |
| ·表达产物存在形式的检测 | 第61-62页 |
| ·可溶性表达产物的提取 | 第62页 |
| ·不溶性表达产物(包涵体)的提取和复性 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第62-63页 |
| ·Western-blot试验 | 第63页 |
| ·间接免疫荧光定位 | 第63-64页 |
| ·ELISA操作步骤 | 第64页 |
| ·二抗稀释倍数的确定 | 第64页 |
| ·抗原最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定(方阵滴定) | 第64-65页 |
| ·ELISA阴、阳性临界点的确定 | 第65页 |
| ·ELISA特异性试验 | 第65页 |
| ·ELISA敏感性试验 | 第65页 |
| ·ELISA的应用 | 第65-66页 |
| ·His-BoP29间接ELISA对临床样品的检测 | 第65页 |
| ·His-BoP29间接ELISA对实验感染牛的血清抗体监测 | 第65-66页 |
| 4 结果与分析 | 第66-89页 |
| ·东方巴贝斯虫单克隆抗体制备 | 第66-68页 |
| ·免疫脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞的融合 | 第66页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第66-67页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第67-68页 |
| ·东方巴贝斯虫cDNA文库的免疫筛选 | 第68-78页 |
| ·巴贝斯虫裂殖子单抗筛选结果及PCR鉴定 | 第68-69页 |
| ·单抗筛选阳性克隆的核苷酸序列测定及同源性分析 | 第69-72页 |
| ·McAb-A2 克隆子插入核苷酸片段序列 | 第70页 |
| ·McAb-A2克隆子插入片段氨基酸序列预测 | 第70-71页 |
| ·McAb-A2 克隆子插入核苷酸片段同源性分析 | 第71页 |
| ·BoP29(McAb-A2克隆插入序列)蛋白质功能和结构分析 | 第71-72页 |
| ·兔抗巴贝斯虫多抗筛选结果及分析 | 第72-78页 |
| ·ms-7-1克隆子的插入核苷酸序列以及同源分析 | 第73页 |
| ·ms-37-1克隆子的插入核苷酸序列以及同源分析 | 第73-74页 |
| ·ms-59-1克隆子的插入核苷酸序列以及同源分析 | 第74-75页 |
| ·ms-70-2克隆子的插入核苷酸序列以及同源分析 | 第75页 |
| ·ms-88-2克隆子的插入核苷酸序列以及同源分析 | 第75-76页 |
| ·ms-99-1克隆子的插入核苷酸序列以及同源分析 | 第76页 |
| ·ms-110-1克隆子的插入核苷酸序列以及同源分析 | 第76-77页 |
| ·ms-128-1克隆子的插入核苷酸序列以及同源分析 | 第77-78页 |
| ·东方巴贝斯虫BoP-29的克隆表达 | 第78-83页 |
| ·基因的PCR扩增 | 第78页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第78-80页 |
| ·基因序列的测定与分析 | 第80页 |
| ·重组质粒在E.coli中的表达与表达产物分析鉴定 | 第80-82页 |
| ·表达产物的存在形式 | 第82-83页 |
| ·东方巴贝斯虫BoP-29的间接免疫荧光定位 | 第83-84页 |
| ·东方巴贝斯虫His-BoP29重组蛋白间接ELISA诊断方法建立及应用的结果与分析 | 第84-89页 |
| ·二抗稀释倍数的确定 | 第84-85页 |
| ·抗原最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定 | 第85-86页 |
| ·His-BoP29间接ELISA阴、阳性临界点的确定 | 第86页 |
| ·His-BoP29间接ELISA特异性试验 | 第86-87页 |
| ·His-BoP29间接ELISA敏感性试验 | 第87页 |
| ·His-BoP29间接ELISA的应用 | 第87-89页 |
| ·His-BoP29间接ELISA对临床样品的检测 | 第87页 |
| ·His-BoP29间接ELISA对实验感染牛的血清抗体监测 | 第87-89页 |
| 5 讨论 | 第89-98页 |
| ·东方巴贝斯虫单克隆抗体制备 | 第89-92页 |
| ·动物免疫 | 第89-90页 |
| ·免疫脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞细胞的融合 | 第90页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第90-91页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第91-92页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第92页 |
| ·单克隆抗体制备过程中的污染控制 | 第92页 |
| ·东方巴贝斯虫cDNA文库的免疫筛选 | 第92-95页 |
| ·东方巴贝斯虫BoP-29的克隆表达以及定位 | 第95-96页 |
| ·东方巴贝斯虫His-BoP29重组蛋白间接ELISA诊断方法建立及应用 | 第96-98页 |
| ·His-BoP29间接ELISA特异性试验 | 第96-97页 |
| ·His-BoP29间接ELISA的应用 | 第97-98页 |
| ·临床样品的检测 | 第97页 |
| ·实验感染东方巴贝斯虫水牛的抗体监测 | 第97-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 附录1 | 第113页 |
| 附录2 | 第113页 |
