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枯草芽孢杆菌G8发酵条件的优化、抗菌物质的部分特性分析及分离纯化

摘要第1-12页
ABSTRACT第12-14页
1 引言第14-29页
   ·枯草芽孢杆菌在病害生物防治中的应用现状第14-16页
     ·国外应用现状第14-15页
     ·国内应用现状第15-16页
   ·枯草芽孢杆菌在植物病害防治中的作用机制第16-22页
     ·竞争作用第16-17页
     ·拮抗作用第17-21页
     ·诱导抗性第21页
     ·促生作用第21-22页
   ·生防枯草芽孢杆菌研发与应用途径第22-27页
     ·生防枯草芽孢杆菌的育种研究第22-26页
     ·发酵培养研究第26-27页
     ·剂型和配方研究第27页
   ·枯草芽孢杆菌在病害防治应用中存在的问题及措施第27-28页
     ·与化学农药或抗生素复配防病第27-28页
     ·与其它拮抗微生物协同防病第28页
   ·本研究的目的及意义第28-29页
2 材料与方法第29-47页
   ·材料第29-31页
     ·供试菌株第29页
     ·供试培养基第29页
     ·主要仪器与试剂第29-31页
   ·抑菌活性测定方法第31页
     ·平板对峙法(方中达,2005)第31页
     ·生长速率法(方中达,2005)第31页
     ·琼脂孔扩散对峙法(Hultmark D,1980)第31页
   ·拮抗菌株的活化与保藏第31页
   ·无菌发酵液的制备方法第31-32页
   ·菌株诱变试验第32页
     ·G8 菌株对数生长期的测定第32页
     ·G8 菌悬液的制备第32页
     ·诱变处理第32页
     ·拮抗活性的检测第32页
   ·G8 发酵条件优化第32-34页
     ·液体种子的制备第32页
     ·发酵培养第32页
     ·培养基组分筛选单因素试验第32-33页
     ·培养基组分的正交试验第33页
     ·培养条件的优化第33页
     ·活性测定第33-34页
   ·抗菌蛋白的提取及含量测定第34-35页
     ·抗菌蛋白的提取及最佳硫酸铵饱和度的确定第34页
     ·蛋白含量测定方法第34-35页
   ·抗菌蛋白部分特性分析第35-36页
     ·蛋白的热稳定性第35页
     ·金属离子和表面活性剂对蛋白活性的影响第35页
     ·蛋白酶对活性的影响第35页
     ·pH 值对活性的影响第35页
     ·细胞壁降解酶活性检测第35-36页
   ·抗菌蛋白的柱层析纯化第36-44页
     ·Sephadex G-100 凝胶层析第36-38页
     ·DE-52 阴离子交换层析第38页
     ·CM Sepharose CL-6B 阳离子交换层析第38-39页
     ·Pheny-Sepharose 6 FF 疏水层析第39页
     ·纯度检测及分子量的测定第39-44页
   ·抗菌蛋白的薄层层析纯化第44-45页
     ·蛋白的提取第44页
     ·薄层层析(TLC)第44-45页
     ·RP-HPLC第45页
   ·红外光谱(IR)分析第45页
   ·抗菌蛋白对黄瓜菌核病菌菌丝的毒力测定第45-46页
   ·抗菌蛋白对黄瓜菌核病菌菌丝体细胞膜透性的影响第46-47页
3 结果与分析第47-70页
   ·菌株诱变试验第47页
     ·G8 菌株对数生长期的测定第47页
     ·G8 菌株紫外复合LiCl 诱变结果第47页
   ·G8 发酵条件的优化第47-56页
     ·培养基的优化第47-52页
     ·发酵条件的优化第52-56页
   ·蛋白提取和含量测定第56-57页
     ·最佳硫酸铵饱和度的确定第56页
     ·蛋白质含量标准曲线绘制第56-57页
   ·抗菌蛋白部分特性分析第57-58页
     ·蛋白的热稳定性第57页
     ·金属离子和表面活性剂对蛋白活性的影响第57页
     ·蛋白酶对活性的影响第57页
     ·pH 值对活性的影响第57页
     ·细胞壁降解酶活性检测第57-58页
   ·抗菌蛋白的柱层析纯化第58-63页
     ·Sephadex G-100 凝胶层析第58-59页
     ·DE-52 阴离子交换层析第59-60页
     ·CM Sepharose CL-6B 阳离子交换层析第60页
     ·Pheny-Sepharose 6 FF 疏水层析第60-61页
     ·纯度检测及分子量的测定第61-63页
   ·抗菌蛋白的薄层层析纯化第63-67页
     ·甲醇抽提沉淀样品的TLC第63-64页
     ·两种蛋白沉淀方法的比较第64-65页
     ·条带活性的测定第65页
     ·表面张力的测定第65页
     ·排油活性试验第65页
     ·RP-HPLC 法鉴定纯度第65-67页
   ·红外光谱(IR)分析第67-68页
   ·抗菌蛋白对黄瓜菌核病菌菌丝的毒力第68页
   ·抗菌蛋白对黄瓜菌核病菌菌丝体细胞膜透性的影响第68-70页
4 讨论第70-73页
   ·G8 发酵条件优化的目的意义第70-71页
   ·抗菌蛋白的理化性质第71页
   ·G8 抗菌蛋白的纯化第71-72页
   ·抗菌蛋白对黄瓜菌核病菌细胞膜透性的影响第72-73页
5 结论第73-74页
   ·枯草芽孢杆菌G8 的发酵条件优化第73页
   ·抗菌蛋白的理化特性第73页
   ·抗菌蛋白的分离纯化第73页
   ·抗菌蛋白的毒力和其对病菌细胞膜透性的影响第73-74页
6 参考文献第74-85页
7 致谢第85-86页
8 攻读硕士学位期间发表论文情况第86页

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