| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-17页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第17-26页 |
| 第一章 疱疹病毒在感染宿主细胞复制及致病特征 | 第17-20页 |
| 1 疱疹病毒概述 | 第17页 |
| 2 疱疹病毒的形态学特征 | 第17-18页 |
| 3 疱疹病毒的感染机制 | 第18-19页 |
| ·疱疹病毒的吸附 | 第18页 |
| ·穿入和脱壳 | 第18页 |
| ·生物合成 | 第18页 |
| ·装配和释放 | 第18-19页 |
| 4 疱疹病毒的致病特征 | 第19-20页 |
| ·疱疹病毒潜伏感染的分子机制 | 第19页 |
| ·潜伏感染的再激活 | 第19-20页 |
| 第二章 疱疹病毒UL34基因及其蛋白的研究进展 | 第20-26页 |
| 1 鸭瘟病毒研究进展 | 第20页 |
| 2 疱疹病毒UL34基因序列及编码蛋白结构特点 | 第20-21页 |
| ·疱疹病毒UL34基因序列特点 | 第20页 |
| ·UL34编码蛋白结构特点 | 第20-21页 |
| 3 UL34在病毒复制中的作用 | 第21-22页 |
| ·UL34在病毒初始膜化中的作用 | 第21页 |
| ·UL34在病毒衣壳出芽中的作用 | 第21-22页 |
| 4 UL34蛋白与其他蛋白的相互作用 | 第22-24页 |
| ·UL34蛋白与UL31蛋白的相互作用 | 第22页 |
| ·UL34蛋白和Us3蛋白的相互作用 | 第22-23页 |
| ·UL34蛋白与动力蛋白的相互作用 | 第23页 |
| ·UL34对核纤层蛋白的调控功能 | 第23-24页 |
| 5 展望 | 第24页 |
| 6 选题目的及意义 | 第24-26页 |
| 第二部分 试验研究 | 第26-77页 |
| 第三章 鸭瘟病毒UL34基因的克隆和分子特性分析 | 第26-34页 |
| 1 材料 | 第26页 |
| ·毒株、载体和细胞 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要生物信息学分析软件 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-27页 |
| ·UL34基因的发现 | 第26页 |
| ·UL34基因的克隆和测序 | 第26-27页 |
| ·UL34核苷酸序列及其编码蛋白的生物信息学分析 | 第27页 |
| ·UL34基因密码子偏爱性分析 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-31页 |
| ·UL34基因的发现 | 第27-28页 |
| ·DPV UL34基因的克隆和测序 | 第28页 |
| ·UL34基因及其编码蛋白的序列比对 | 第28-29页 |
| ·UL34编码蛋白的功能预测 | 第29-30页 |
| ·UL34基因密码子偏爱性分析 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-34页 |
| ·利用UL34基因对DPV的分类依据 | 第31-32页 |
| ·蛋白质结构和功能的关系 | 第32-33页 |
| ·UL34基因的密码子特点分析 | 第33-34页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL34基因的表达以及抗血清的制备 | 第34-50页 |
| 1 材料 | 第34-36页 |
| ·毒株、载体和细胞 | 第34页 |
| ·试验动物 | 第34页 |
| ·主要试剂及配制 | 第34-36页 |
| ·细胞培养液 | 第34页 |
| ·核酸提取液 | 第34-35页 |
| ·镍螯合琼脂糖凝胶色谱分离His标签重组蛋白包涵体溶液 | 第35页 |
| ·弗氏不完全佐剂 | 第35-36页 |
| ·其他 | 第36页 |
| ·试验仪器 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-42页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的制备 | 第36页 |
| ·病毒DNA的抽提 | 第36-37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·重组质粒pMD-18/UL34及pET-32a(+)的提取 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA的酶切和回收 | 第38页 |
| ·连接 | 第38页 |
| ·制备感受态细胞DH5α和BL21(DE3) | 第38-39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·转化菌落的鉴定 | 第39页 |
| ·工程菌的诱导表达及表达形式分析 | 第39-40页 |
| ·重组表达菌株的培养及表达 | 第39-40页 |
| ·表达条件的优化 | 第40页 |
| ·表达形式分析 | 第40页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·高免血清的制备 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白疫苗的制备 | 第40-41页 |
| ·家兔免疫程序 | 第41页 |
| ·免疫效价的检测 | 第41页 |
| ·高免血清的纯化 | 第41-42页 |
| ·兔抗DPV高免血清中IgG的提取 | 第41-42页 |
| ·利用High Q阴离子交换柱纯化抗体 | 第42页 |
| ·Western blot检测表达蛋白 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-47页 |
| ·UL34基因表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·UL34基因的表达 | 第43页 |
| ·表达条件的优化 | 第43-44页 |
| ·表达形式的分析 | 第44页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·抗血清的效价测定 | 第45页 |
| ·Western blot检测 | 第45-46页 |
| ·兔抗UL34 IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·UL34基因克隆和表达的意义 | 第47页 |
| ·表达系统的选择 | 第47-48页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第48页 |
| ·关于蛋白及抗血清IgG的纯化 | 第48-50页 |
| 第五章 UL34基因编码蛋白在鸭胚成纤维细胞中的定位研究 | 第50-57页 |
| 1 材料 | 第50页 |
| ·毒株和细胞 | 第50页 |
| ·试剂的配制 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-51页 |
| ·间接免疫荧光鸭胚成纤维细胞定位方法的建立 | 第50-51页 |
| ·方法的具体步骤 | 第50-51页 |
| ·特异性检测 | 第51页 |
| ·结果判定标准 | 第51页 |
| ·UL34基因产物在鸭胚成纤维细胞内定位的观察 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-54页 |
| ·间接免疫荧光法条件的优化 | 第51-52页 |
| ·UL34基因产物在鸭胚成纤维细胞中的动态监测 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| ·蛋白质定位分析方法的探讨 | 第54页 |
| ·免疫荧光细胞定位条件优化的探讨 | 第54-55页 |
| ·UL34编码蛋白在鸭胚成纤维细胞内的定位分析 | 第55页 |
| ·UL34编码蛋白在鸭胚成纤维细胞内的时相分析 | 第55-56页 |
| ·UL34编码蛋白在病毒复制中的功能探讨 | 第56-57页 |
| 第六章 应用间接免疫荧光法检测UL34蛋白在鸭体内的分布 | 第57-63页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| ·毒株和试验材料 | 第57页 |
| ·主要试剂及配制 | 第57页 |
| ·其他 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-59页 |
| ·玻片的处理 | 第58页 |
| ·组织切片 | 第58页 |
| ·免疫荧光染色条件的优化 | 第58页 |
| ·特异性试验 | 第58-59页 |
| ·结果的判定 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-61页 |
| ·间接免疫荧光方法的建立和优化 | 第59页 |
| ·特异性试验 | 第59页 |
| ·间接免疫荧光对人工感染DPV病例的检测 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| ·间接免疫荧光染色法的建立和优化 | 第61页 |
| ·UL34蛋白在鸭体内定位分布与病毒特性、基因功能的关系 | 第61-62页 |
| ·利用UL34蛋白建立IFA方法的意义 | 第62-63页 |
| 第七章 UL34基因的转录时相研究 | 第63-72页 |
| 1 材料 | 第63页 |
| ·毒株和质粒 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·荧光定量PCR引物 | 第63页 |
| 2 方法 | 第63-66页 |
| ·荧光定量PCR cDNA模板的制各 | 第63-65页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的培养与病毒感染 | 第64页 |
| ·RNA的提取 | 第64页 |
| ·RNA中DNA的去除 | 第64页 |
| ·RNA完整性及纯度测定 | 第64页 |
| ·反转录合成cDNA | 第64-65页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第65-66页 |
| ·引物特异性检测 | 第65页 |
| ·引物标准曲线的绘制 | 第65-66页 |
| ·荧光定量PCR | 第66页 |
| ·数据的分析 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-70页 |
| ·RNA完整性及纯度分析 | 第66页 |
| ·引物特异性验证 | 第66-67页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第67-68页 |
| ·FQ-PCR对DPV UL34基因转录时相的定量检测 | 第68-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| ·荧光定量PCR | 第70页 |
| ·荧光定量PCR条件的优化 | 第70-71页 |
| ·荧光定量PCR数据分析 | 第71页 |
| ·UL34基因的转录时相分析 | 第71-72页 |
| 第八章 UL34基因的表达时相研究 | 第72-77页 |
| 1 材料 | 第72页 |
| ·细胞、毒株和抗体 | 第72页 |
| ·主要试剂及配制 | 第72页 |
| 2 方法 | 第72-73页 |
| ·病毒感染 | 第72页 |
| ·细胞收获 | 第72页 |
| ·细胞蛋白的提取 | 第72-73页 |
| ·Western blot分析 | 第73页 |
| 3 结果 | 第73-74页 |
| ·细胞蛋白的提取及SDS-PAGE检测 | 第73页 |
| ·DPV UL34基因产物在宿主细胞中的表达时相 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-77页 |
| ·关于Western blot表达时相分析 | 第74-75页 |
| ·鸭瘟病毒UL34基因表达谱分析 | 第75页 |
| ·鸭瘟病毒UL34基因与病毒复制的关系 | 第75-77页 |
| 第三部分 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第86页 |
| 参加研究课题情况 | 第86页 |
