| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| ·烟草及烟草病毒病概述 | 第12页 |
| ·烟草属的分类 | 第12页 |
| ·我国烟草病毒病概况 | 第12页 |
| ·马铃薯Y 病毒 | 第12-14页 |
| ·马铃薯Y 病毒的基本特征 | 第12-13页 |
| ·PVY 的核酸组成 | 第13页 |
| ·PVY 对烟草的危害 | 第13页 |
| ·PVY 的研究现状 | 第13-14页 |
| ·植物抗病毒病的研究进展 | 第14-17页 |
| ·植物对病毒病的抗病机制 | 第14页 |
| ·植物的诱导抗病性 | 第14页 |
| ·植物抗病基因研究进展 | 第14-17页 |
| ·研究技术 | 第17-20页 |
| ·抑制差减杂交技术 | 第17-18页 |
| ·cDNA 芯片技术 | 第18页 |
| ·SSH 与cDNA 芯片技术的联合应用 | 第18-19页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术及其应用 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的意义、主要内容和技术路线 | 第20-22页 |
| ·目的意义 | 第20页 |
| ·主要内容 | 第20-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 抑制差减杂交文库的构建与cDNA 芯片筛选 | 第22-38页 |
| ·实验材料和仪器 | 第22页 |
| ·材料与处理 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·常用溶液和培养基的配制 | 第22-23页 |
| ·常用溶液的配制 | 第22页 |
| ·常用培养基的配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-32页 |
| ·总RNA 提取 | 第23页 |
| ·mRNA 纯化 | 第23-24页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第24-26页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第26-32页 |
| ·cDNA 芯片筛选差异表达基因样品制备 | 第32-33页 |
| ·cDNA 芯片样品制备 | 第32-33页 |
| ·cDNA 芯片的制备 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-38页 |
| ·总RNA 提取和检测 | 第33-34页 |
| ·mRNA 纯化与检测 | 第34页 |
| ·cDNA 双链合成与RsaⅠ酶切 | 第34页 |
| ·二次差减杂交与二次抑制PCR | 第34-35页 |
| ·抑制性消减杂交文库的构建 | 第35页 |
| ·cDNA 芯片实验结果分析 | 第35-36页 |
| ·抑制性差减文库结果分析 | 第36-38页 |
| 第三章 受PVY 诱导相关基因的克隆与序列分析 | 第38-56页 |
| ·实验材料、试剂和主要仪器 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·药品和试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-41页 |
| ·总RNA 的提取与检测 | 第38页 |
| ·反转录合成cDNA 第一条链 | 第38-39页 |
| ·RACE 法扩增Ntasp 和NtPA 末端片段 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-53页 |
| ·Ntasp 的克隆及序列分析 | 第41-46页 |
| ·NtPA 的克隆及序列分析 | 第46-49页 |
| ·NtERD1 的分离及序列分析 | 第49-51页 |
| ·NtCPIP3 的分离及序列分析 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·RACE 技术获得全长基因 | 第53-54页 |
| ·基因的克隆与分析 | 第54-56页 |
| 第四章 Ntasp、NtPA、NtERD1 和NtCPIP3 的荧光定量表达分析 | 第56-66页 |
| ·材料与方法 | 第56-58页 |
| ·实验材料与处理 | 第56页 |
| ·总RNA 的提取 | 第56页 |
| ·反转录反应 | 第56页 |
| ·荧光定量引物设计 | 第56-57页 |
| ·Realtime PCR 反应 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-62页 |
| ·溶解曲线检测内参基因与目的基因引物特异性 | 第58页 |
| ·内参基因与目的基因扩增曲线分析 | 第58页 |
| ·内参基因与目的基因标准曲线的构建 | 第58-61页 |
| ·不同基因的相对定量表达分析 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-66页 |
| ·Realtime PCR 技术 | 第62-63页 |
| ·普通烟草受PVY 诱导表达多种基因 | 第63-66页 |
| 第五章 结论与展望 | 第66-68页 |
| ·结论 | 第66页 |
| ·创新点 | 第66-67页 |
| ·工作展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76-77页 |
