| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-24页 |
| ·研究目的和意义 | 第18页 |
| ·研究内容和方法 | 第18-20页 |
| ·重组杆状病毒的构建 | 第18-19页 |
| ·间接ELISA 血清抗体检测方法的建立和应用 | 第19页 |
| ·抗PPRV-N 蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第19页 |
| ·单抗竞争性ELISA 方法的建立和应用 | 第19-20页 |
| ·小反刍兽疫的研究进展 | 第20-22页 |
| ·小反刍兽疫病毒的病原学 | 第20页 |
| ·小反刍兽疫的流行病学 | 第20-21页 |
| ·小反刍兽疫的诊断及预防 | 第21-22页 |
| ·杆状病毒昆虫表达系统研究进展 | 第22-24页 |
| ·杆状病毒的生物学特性 | 第22-23页 |
| ·杆状病毒转移载体的发展 | 第23页 |
| ·杆状病毒-昆虫表达系统的应用 | 第23-24页 |
| 第二章 小反刍兽疫病毒N 蛋白在杆状病毒中的克隆表达 | 第24-42页 |
| ·试验材料 | 第24-29页 |
| ·菌株、细胞株和质粒 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·试验所用溶液 | 第25-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-36页 |
| ·目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·重组供体质粒pFastBacTM HTA-N 的构建 | 第30-31页 |
| ·重组供体质粒在细菌内的转座反应 -转化 DH10Bac | 第31页 |
| ·重组bacmid DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·重组bacmid DNA 的鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组bacmid 转染Sf21 细胞 | 第33-34页 |
| ·分离 P1 代种毒 | 第34-35页 |
| ·扩增 P1 代种毒 | 第35-36页 |
| ·重组病毒的 SDS-PAGE 鉴定 | 第36页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白的抗原性 | 第36页 |
| ·试验结果 | 第36-40页 |
| ·重组供体质粒pFastBacTM HTA-N 的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组 Bacmid-PPRV-N 质粒的 PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒转染 Sf21 后的细胞形态 | 第37-38页 |
| ·重组病毒的 SDS-PAGE 鉴定 | 第38-39页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白的抗原性 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 小反刍兽疫病毒重组 N 蛋白间接ELISA 方法的建立 | 第42-53页 |
| ·试验材料 | 第42-44页 |
| ·病毒和血清 | 第42页 |
| ·主要试剂和器材 | 第42-43页 |
| ·试验所用溶液 | 第43-44页 |
| ·试验方法 | 第44-46页 |
| ·Bacmid-PPRV-N 重组蛋白的表达 | 第44页 |
| ·Bacmid-PPRV-N 重组蛋白的纯化 | 第44页 |
| ·Bacmid-PPRV-N 重组蛋白间接ELISA 方法的操作步骤 | 第44-45页 |
| ·抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第45页 |
| ·最佳封闭试剂及最佳封闭时间的选择 | 第45页 |
| ·血清作用时间的确定 | 第45页 |
| ·酶标二抗稀释度及作用时间的确定 | 第45页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第45页 |
| ·cutoff 值及阴阳性标准的确定 | 第45-46页 |
| ·批内、批间重复性评价 | 第46页 |
| ·间接ELISA 检测方法的特异性评价 | 第46页 |
| ·临床检测的符合率试验 | 第46页 |
| ·试验结果 | 第46-51页 |
| ·Bacmid-PPRV-N 重组蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| ·抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第47页 |
| ·最佳封闭试剂及最佳封闭时间的选择 | 第47-48页 |
| ·血清作用时间确定 | 第48页 |
| ·酶标二抗稀释度及作用时间的确定 | 第48-49页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第49页 |
| ·cutoff 值及阴阳性标准的确定 | 第49页 |
| ·批内、批间重复性的评价 | 第49-50页 |
| ·间接ELISA 特异性试验 | 第50-51页 |
| ·临床检测的符合率试验 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 小反刍兽疫病毒 N 蛋白单克隆抗体的制备 | 第53-68页 |
| ·试验材料 | 第53-55页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·菌株、细胞及实验动物 | 第54页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第54页 |
| ·主要溶液的配制 | 第54-55页 |
| ·试验方法 | 第55-61页 |
| ·纯化抗原免疫小鼠 | 第55页 |
| ·小鼠免疫血清效价的测定（间接ELISA 方法） | 第55-56页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第56-57页 |
| ·SP2/0 骨髓瘤细胞的准备 | 第57页 |
| ·脾淋巴细胞悬液的准备 | 第57页 |
| ·脾淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合 | 第57-58页 |
| ·筛选抗原的准备 | 第58页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第58页 |
| ·阳性孔的亚克隆 | 第58-59页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第59页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第59页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第59页 |
| ·单克隆抗体的Western blot 鉴定 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体1D5 的免疫荧光试验 | 第60页 |
| ·单克隆抗体腹水效价的测定 | 第60页 |
| ·单克隆抗体亲和力测定 | 第60-61页 |
| ·单克隆抗体特异性测定 | 第61页 |
| ·杂交瘤细胞的稳定性 | 第61页 |
| ·试验结果 | 第61-66页 |
| ·小鼠免疫血清效价的测定 | 第61-62页 |
| ·细胞融合率计算 | 第62页 |
| ·杂交瘤细胞阳性克隆率计算 | 第62页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第62页 |
| ·单克隆抗体的Western blot 鉴定 | 第62-63页 |
| ·单克隆抗体1D5 的免疫荧光试验 | 第63-64页 |
| ·单克隆抗体腹水效价的测定 | 第64页 |
| ·单克隆抗体亲和力测定 | 第64-65页 |
| ·单抗特异性测定 | 第65-66页 |
| ·杂交瘤细胞的稳定性 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 小反刍兽疫单抗竞争性 ELISA 检测方法的建立 | 第68-75页 |
| ·试验材料 | 第68页 |
| ·试验方法 | 第68-70页 |
| ·竞争 ELISA 的原理 | 第68页 |
| ·Bacmid-PPRV-N 最佳包被浓度和单抗最佳稀释度的确定 | 第68-69页 |
| ·Bacmid-PPRV-N 蛋白包被方式的确定 | 第69页 |
| ·最佳封闭方式的确定 | 第69页 |
| ·山羊抗小鼠IgG-HRP 最佳工作浓度的确定 | 第69页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第69页 |
| ·竞争ELISA 操作程序 | 第69页 |
| ·待检血清稀释度的确定 | 第69页 |
| ·单抗竞争性ELISA 的特异性评价 | 第69-70页 |
| ·单抗竞争性ELISA 的稳定性 | 第70页 |
| ·单抗竞争性ELISA 的应用 | 第70页 |
| ·试验结果 | 第70-74页 |
| ·Bacmid-PPRV-N 最佳包被浓度和单抗最佳稀释度的确定 | 第70-71页 |
| ·Bacmid-PPRV-N 蛋白包被方式的确定 | 第71页 |
| ·最佳封闭方式的确定 | 第71页 |
| ·山羊抗小鼠IgG-HRP 最佳工作浓度的确定 | 第71-72页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第72页 |
| ·待检血清稀释度的确定 | 第72页 |
| ·单抗竞争性ELISA 的特异性评价 | 第72-73页 |
| ·单抗竞争性ELISA 的稳定性 | 第73页 |
| ·单抗竞争性ELISA 方法的应用 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| 第六章 总结 | 第75-77页 |
| ·结论 | 第75页 |
| ·本研究的下一步设想 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简历 | 第83页 |
