| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-25页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的历史背景 | 第13页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的特征 | 第13-18页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行病学特征 | 第14页 |
| ·病毒的基因组结构 | 第14-15页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组所编码的蛋白 | 第15-18页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒感染机体的免疫保护机制 | 第18-19页 |
| ·GP5蛋白功能的研究进展 | 第19-20页 |
| ·噬菌体展示技术的研究进展 | 第20-24页 |
| ·噬菌体展示技术基本原理 | 第20-22页 |
| ·噬菌体展示技术的应用 | 第22-24页 |
| ·研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-43页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·菌种与载体 | 第25页 |
| ·工具酶、试剂盒和抗体试剂 | 第25页 |
| ·标准参照物 | 第25页 |
| ·溶液的配制 | 第25-26页 |
| ·培养基的配制 | 第26页 |
| ·间接ELISA检测主要试剂 | 第26页 |
| ·免疫印迹(Western-blot)主要试剂 | 第26-27页 |
| ·噬菌体十二肽库筛选主要试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-42页 |
| ·病毒增殖 | 第28页 |
| ·病毒总RNA的提取 | 第28页 |
| ·RT-PCR | 第28-29页 |
| ·PCR扩增片段的克隆 | 第29-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌表达系统中的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的纯化、复性及活性鉴定 | 第35-36页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第36页 |
| ·多克隆抗血清的鉴定及生物活性的检测 | 第36-37页 |
| ·噬菌体随机十二肽库对靶分子亲和配体的生物淘选 | 第37-39页 |
| ·结合克隆的特征鉴定 | 第39-41页 |
| ·所选多肽配体共有氨基酸序列的推导及合成 | 第41页 |
| ·所选多肽的生物活性鉴定 | 第41-42页 |
| ·噬菌体体内抗病毒活性 | 第42页 |
| ·病毒纯化及噬菌体扩增 | 第42页 |
| ·实验小鼠分组及免疫 | 第42页 |
| ·免疫小鼠外周血液中抗PRRSV及GP5重组蛋白特异性抗体IgG测定 | 第42页 |
| ·数据处理 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-57页 |
| ·GP5蛋白基因的克隆 | 第43-46页 |
| ·GP5蛋白基因的RT-PCR扩增结果 | 第43页 |
| ·重组质粒pMD-18-T-GP5双酶切和PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pMD-18-T-GP5的测序结果及分析 | 第44-46页 |
| ·原核表达载体pET30a-GP5的构建 | 第46-47页 |
| ·GP5n和GP5c基因的亚克隆 | 第46页 |
| ·重组表达质粒的PCR鉴定和限制性酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的表达及活性鉴定 | 第47-50页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第47页 |
| ·重组蛋白的Western Blot检测 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的活性鉴定 | 第49-50页 |
| ·GP5多克隆抗血清的制备及活性鉴定 | 第50-51页 |
| ·多克隆抗血清效价的测定 | 第50页 |
| ·多克隆抗血清的免疫荧光实验结果 | 第50-51页 |
| ·多克隆抗血清的病毒抑制试验结果 | 第51页 |
| ·噬菌体十二肽库对GP5重组蛋白亲和配体的生物淘选 | 第51-56页 |
| ·噬菌体十二肽库对靶分子的四轮淘洗结果 | 第51-55页 |
| ·所选多肽的生物活性检测结果 | 第55-56页 |
| ·小鼠外周血液抗PRRSV和GP5蛋白IgG抗体含量动态变化 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-62页 |
| ·PRRSV的分离鉴定与培养 | 第57页 |
| ·GP5蛋白基因的克隆与变异 | 第57-58页 |
| ·融合基因原核载体表达质粒的设计与构建 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的表达纯化与活性鉴定 | 第59页 |
| ·多克隆抗血清的制备及活性鉴定 | 第59-60页 |
| ·GP5蛋白亲和肽的筛选与鉴定 | 第60-61页 |
| ·噬菌体体内免疫试验 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
