| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| ·细胞穿膜肽的概述 | 第11-12页 |
| ·细胞穿膜肽的跨膜途径 | 第12-14页 |
| ·生物活性的物质的穿膜肽运输 | 第14-16页 |
| ·小分子物质的运输 | 第14-15页 |
| ·多肽和蛋白质分子的穿膜肽运输 | 第15-16页 |
| ·细胞穿膜肽在肿瘤治疗方面的潜力 | 第16-21页 |
| ·凋亡蛋白的抗肿瘤特性 | 第17-18页 |
| ·新型的细胞穿膜肽-人源性的肝素结合域(HBD) | 第18-21页 |
| ·课题的研究背景及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-38页 |
| ·蛋白表达纯化实验的常用材料与仪器 | 第23-26页 |
| ·重组质粒与菌株 | 第23页 |
| ·主要溶液及各种实验试剂的配制方法 | 第23-25页 |
| ·大肠杆菌表达的培养基、诱导剂和抗性的配制 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳所用试剂的配制 | 第23-25页 |
| ·蛋白浓度测定相关试剂的配制 | 第25页 |
| ·实验主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法之蛋白表达纯化 | 第26-32页 |
| ·大肠杆菌的培养方法和菌种保藏 | 第26页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第26-27页 |
| ·聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)实验操作方法 | 第27页 |
| ·用Bradford法测定蛋白浓度 | 第27-28页 |
| ·蛋白标准曲线的制作方法 | 第27-28页 |
| ·目的蛋白浓度的测定方法 | 第28页 |
| ·pET28a-TAT-VP3和pET28a-HBD-VP3在E.coli中的诱导表达鉴定 | 第28-30页 |
| ·HBD-VP3融合蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| ·TAT-VP3融合蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白的诱导表达 | 第29页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白的诱导表达 | 第29页 |
| ·重组蛋白表达菌体的收集与破碎 | 第29页 |
| ·重组蛋白表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的纯化方法 | 第30-32页 |
| ·目的融合蛋白的Ni亲和层析纯化方法 | 第30页 |
| ·目的融合蛋白的离子交换层析纯化方法 | 第30-31页 |
| ·目的融合蛋白的透析除盐和咪唑 | 第31页 |
| ·目的融合蛋白的变性与复性方法 | 第31-32页 |
| ·细胞实验常用的材料与仪器 | 第32-34页 |
| ·不同的肿瘤细胞株 | 第32-33页 |
| ·细胞实验所用试剂及配制 | 第33-34页 |
| ·细胞实验所用试剂 | 第33页 |
| ·细胞实验所用试剂的配制方法 | 第33-34页 |
| ·细胞实验所用的主要仪器 | 第34页 |
| ·细胞实验的主要方法 | 第34-38页 |
| ·细胞培养方法之复苏 | 第34-35页 |
| ·细胞培养之换液和传代 | 第35页 |
| ·细胞培养之冻存 | 第35-36页 |
| ·细胞凋亡检测实验之MTT法 | 第36页 |
| ·穿膜肽融合蛋白的穿膜实验 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-71页 |
| ·HBD-VP3融合蛋白的表达纯化及抑瘤活性分析 | 第38-45页 |
| ·HBD-VP3融合蛋白的表达鉴定 | 第38页 |
| ·HBD-VP3融合蛋白的纯化 | 第38-44页 |
| ·Ni柱亲和层析法纯化HBD-VP3融合蛋白 | 第39-41页 |
| ·用阳离子交换层析法纯化HBD-VP3 | 第41-44页 |
| ·HBD-VP3的包涵体变复性纯化 | 第44页 |
| ·HBD-VP3融合蛋白诱导HeLa细胞的凋亡 | 第44-45页 |
| ·TAT-VP3融合蛋白的表达纯化及其抑瘤活性的研究 | 第45-48页 |
| ·TAT-VP3融合蛋白的表达鉴定 | 第45-46页 |
| ·TAT-VP3融合蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| ·MTT法TAT-VP3融合蛋白的抑瘤活性 | 第47-48页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白的表达鉴定及纯化 | 第48-50页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白的表达鉴定 | 第48-49页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·初步研究HBD-EGFP融合蛋白在不同细胞中的转导 | 第50-59页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白在HeLa细胞中的穿膜活性 | 第50-51页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白在HepG2细胞中的穿膜活性 | 第51-53页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白在B16细胞中的穿膜活性 | 第53-55页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白在A549细胞中的穿膜活性 | 第55-57页 |
| ·HBD-EGFP融合蛋白在Bcap37细胞中的穿膜活性 | 第57-59页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白的表达鉴定及纯化 | 第59-60页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白的表达鉴定 | 第59页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·初步研究R7-EGFP融合蛋白在不同细胞中的转导 | 第60-67页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白在HeLa细胞中的穿膜活性 | 第60-62页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白在HepG2细胞中的穿膜活性 | 第62-63页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白在B16细胞中的穿膜活性 | 第63-64页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白在A549细胞中的穿膜活性 | 第64-66页 |
| ·R7-EGFP融合蛋白在Bcap37细胞中的穿膜活性 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-71页 |
| ·穿膜肽融合蛋白的表达 | 第67-68页 |
| ·穿膜肽融合蛋白的纯化 | 第68-69页 |
| ·凋亡素融合蛋白的药理活性 | 第69页 |
| ·EGFP融合蛋白的穿膜活性 | 第69-71页 |
| 第四章 结论与展望 | 第71-73页 |
| ·结论 | 第71-72页 |
| ·展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 研究生期间发表论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
