致谢 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-9页 |
1 文献综述 | 第9-17页 |
·植物自交不亲和性及其类型 | 第9页 |
·孢子体自交不亲和研究进展 | 第9-10页 |
·孢子体自交不亲和表现 | 第9页 |
·孢子体自交不亲和发生机制 | 第9-10页 |
·配子体自交不亲和研究进展 | 第10-13页 |
·以S-RNase 为基础的SI 信号转导途径 | 第10-12页 |
·SI 信号分子—S-RNase | 第10-11页 |
·信号分子的接受体——花粉S 蛋白 | 第11页 |
·以S-RNase 为基础的细胞信号转导途径 | 第11-12页 |
·罂粟科SI 信号转导的研究进展 | 第12-13页 |
·禾本科自交不亲和性机理 | 第13页 |
·蛋白质组学的研究进展 | 第13-17页 |
·蛋白质组学分析技术 | 第13-15页 |
·双向电泳 | 第13-14页 |
·图像分析 | 第14-15页 |
·蛋白质组学在植物研究中的应用 | 第15-17页 |
·逆境胁迫下植物蛋白质组学研究 | 第15页 |
·突变体的蛋白质组学研究 | 第15-16页 |
·植物亚细胞蛋白质组学 | 第16-17页 |
2 引言 | 第17-19页 |
3 材料与方法 | 第19-34页 |
·材料 | 第19页 |
·试剂 | 第19页 |
·仪器 | 第19页 |
·蛋白质组分析方法 | 第19-23页 |
·试验材料的种植、取样与鉴定 | 第19页 |
·蛋白质的提取 | 第19-20页 |
·三氯乙酸/丙酮法(TCA/acetone extraction) | 第19页 |
·酚提取法(phenol extraction) | 第19-20页 |
·改良的酚提取法 | 第20页 |
·蛋白质的溶解 | 第20页 |
·蛋白质样品浓度测定 | 第20-21页 |
·第一向等电聚焦电泳条件的优化 | 第21-22页 |
·第二向SDS-PAGE 电泳 | 第22页 |
·凝胶染色 | 第22-23页 |
·凝胶图像分析、蛋白质点的胶内酶解和串联质谱分析 | 第23页 |
·分子生物学类实验方法 | 第23-34页 |
·基因组DNA 的提取 | 第23-25页 |
·P1 和S7 基因DNA 序列的克隆 | 第25-29页 |
·引物 | 第25页 |
·反应体系 | 第25-26页 |
·扩增产物的电泳纯化 | 第26-27页 |
·DNA 片段的克隆 | 第27-29页 |
·PCR 检测阳性克隆 | 第29页 |
·PCR 产物的测序 | 第29页 |
·拟南芥转基因功能验证 | 第29-34页 |
·植物材料与种植方法 | 第29页 |
·引物设计 | 第29-30页 |
·基因序列的扩增 | 第30-31页 |
·表达载体构建 | 第31页 |
·农杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
·PCR 验证及菌种保存 | 第32页 |
·拟南芥转化 | 第32-33页 |
·转基因拟南芥的筛选鉴定 | 第33-34页 |
4 结果与分析 | 第34-50页 |
·自交不亲和与亲和阶段的田间表现 | 第34页 |
·三种方法提取的蛋白质样品双向电泳效果比较 | 第34-36页 |
·不同聚焦时间对双向电泳图谱的影响 | 第36-37页 |
·不同丙烯酰胺浓度对蛋白质分辨率的影响 | 第37页 |
·不同上样量对蛋白质分辨率的影响 | 第37-38页 |
·蛋白质表达分析 | 第38-40页 |
·差异蛋白点的质谱鉴定 | 第40-45页 |
·p1 及s7 基因DNA 序列的克隆 | 第45-46页 |
·拟南芥转基因功能验证试验 | 第46-50页 |
·植物表达载体PBI-P1 及PBI-S7 的构建 | 第46-48页 |
·重组质粒PBI- P1 及PBI-S7 转化农杆菌 | 第48-49页 |
·转基因拟南芥的筛选 | 第49-50页 |
5 讨论 | 第50-52页 |
·如何获得高重现性的双向电泳图谱 | 第50页 |
·差异蛋白质的功能 | 第50-51页 |
·关于自交不亲和相关基因P1 及S7 | 第51页 |
·进一步的研究设想 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-61页 |
附录1 | 第61-63页 |
附录2 | 第63-65页 |
附录3 | 第65-67页 |
Abstract | 第67-68页 |