小麦甲基结合蛋白TaMBD1的体外表达及互作蛋白分析
| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-16页 |
| ·DNA 甲基化与植物生长调控 | 第8页 |
| ·植物MBD蛋白 | 第8-9页 |
| ·MBD蛋白的功能 | 第9-11页 |
| ·蛋白质互作研究方法 | 第11-16页 |
| ·串联亲和纯化 | 第11-13页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第13页 |
| ·酵母双杂技术 | 第13-14页 |
| ·新发展的研究互作技术 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-26页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·植物材料和菌株 | 第16页 |
| ·质粒载体 | 第16页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·LB 培养基 | 第17页 |
| ·抗体 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-26页 |
| ·培养工程菌 | 第17-22页 |
| ·重组载体的构建和转化 | 第17-18页 |
| ·小体积诱导表达实验 | 第18页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第18-20页 |
| ·大体积诱导表达条件优化 | 第20页 |
| ·Western 所需试剂配制 | 第20-21页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第21-22页 |
| ·小麦叶片总蛋白提取 | 第22-23页 |
| ·蛋白纯化以及互作纯化 | 第23-24页 |
| ·缓冲液的配置 | 第23页 |
| ·TaMBD1 蛋白纯化 | 第23-24页 |
| ·蛋白互作纯化 | 第24页 |
| ·双向电泳 | 第24-26页 |
| ·配等电聚焦所需溶液 | 第24-25页 |
| ·泡胀胶条和等电聚焦 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE | 第25-26页 |
| ·质谱分析 | 第26页 |
| 4 结果分析 | 第26-38页 |
| ·TaMBD1 原核表达载体的构建和诱导表达 | 第26-29页 |
| ·TaMBD1 原核表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·转化工程菌鉴定结果 | 第28页 |
| ·小量诱导表达鉴定结果 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白纯化条件优化 | 第29-31页 |
| ·大量诱导表达条件优化 | 第29-30页 |
| ·不同咪唑浓度对重组蛋白纯化的影响 | 第30-31页 |
| ·TaMBD1 互作蛋白的筛选 | 第31-33页 |
| ·小麦叶片水溶蛋白提取 | 第31页 |
| ·叶片中与TaMBD1 互作蛋白的筛选 | 第31-33页 |
| ·互作侯选蛋白的分离 | 第33页 |
| ·侯选蛋白的质谱分析 | 第33-38页 |
| 5 结论与讨论 | 第38-41页 |
| ·诱导表达和纯化条件摸索的条件 | 第39页 |
| ·互作研究方法的选择 | 第39页 |
| ·互作蛋白的确定以及可能的功能分析 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 英文摘要 | 第45-46页 |
