个人简历 | 第3-11页 |
中文摘要 | 第11-15页 |
ABSTRACT | 第15-17页 |
前言 | 第18-26页 |
1 课题背景及意义 | 第18-20页 |
1.1 宫颈癌研究的重要性 | 第18-19页 |
1.2 放射抵抗研究的意义 | 第19页 |
1.3 核蛋白的研究意义 | 第19-20页 |
2 国内外研究动态 | 第20-21页 |
3 存在问题及发展趋势 | 第21页 |
4 课题研究思路 | 第21页 |
5 课题研究结果及结论 | 第21-23页 |
参考文献 | 第23-26页 |
第一部分 宫颈癌放射抗拒性机制研究进展 | 第26-54页 |
1 背景 | 第26页 |
2 宫颈癌放射治疗目前的障碍 | 第26-27页 |
3 表观遗传对肿瘤转移和放疗抗拒的影响 | 第27-31页 |
3.1 表观遗传对抑癌基因的失活有助于放疗抗拒 | 第28-29页 |
3.2 表观遗传的可逆性 | 第29-30页 |
3.3 表观遗传制剂逆转放疗耐受 | 第30-31页 |
4 PI3K/ Akt/ PTEN/ mTOR信号通路对肿瘤转移和放疗抗拒的影响 | 第31-35页 |
4.1 PI3K/Akt在宫颈癌转移和放疗中的作用 | 第32-34页 |
4.2 PTEN在宫颈癌放疗抵抗中的作用 | 第34页 |
4.3 mTOR调节宫颈癌放疗抵抗 | 第34-35页 |
5 自噬在癌症放疗中的双重面孔 | 第35-38页 |
5.1 宫颈癌放疗中的自噬 | 第37-38页 |
6 EMT在宫颈癌转移和放疗抗拒中的作用 | 第38-40页 |
6.1 EMT在宫颈癌转移复发中的作用 | 第38-39页 |
6.2 EMT在放疗抵抗中的作用 | 第39-40页 |
7 肿瘤干细胞在宫颈癌放疗抵抗中的作用 | 第40-42页 |
7.1 肿瘤干细胞(CSC)的概念 | 第40页 |
7.2 宫颈癌可能的肿瘤干细胞标志物 | 第40-41页 |
7.3 肿瘤干细胞(CSC)和非肿瘤干细胞对放射治疗的不同反应 | 第41-42页 |
8 结论和未来展望 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-54页 |
第二部分 获得性放射抵抗宫颈癌细胞株的建立 | 第54-73页 |
1 材料与方法 | 第54-61页 |
1.1 材料 | 第54-56页 |
1.1.1 宫颈癌细胞株 | 第54-55页 |
1.1.2 化学试剂及检测试剂盒 | 第55页 |
1.1.3 实验仪器 | 第55页 |
1.1.4 实验材料的处理 | 第55-56页 |
1.2 方法 | 第56-61页 |
1.2.1 细胞培养 | 第56页 |
1.2.2 细胞冻存 | 第56页 |
1.2.3 细胞复苏 | 第56-57页 |
1.2.4 细胞传代 | 第57页 |
1.2.5 获得性放射抵抗宫颈癌细胞株的建立 | 第57-58页 |
1.2.6 细胞存活能力检测 | 第58页 |
1.2.7 细胞克隆形成能力检测 | 第58-59页 |
1.2.8 细胞凋亡能力检测 | 第59页 |
1.2.9 细胞侵袭能力检测 | 第59-60页 |
1.2.10 细胞增殖能力检测 | 第60-61页 |
1.2.11 统计分析 | 第61页 |
2 结果 | 第61-68页 |
2.1 宫颈癌放疗抗拒细胞系的建立 | 第61-62页 |
2.2 获得性放射抵抗细胞株具备更强的放射后生存能力 | 第62-63页 |
2.3 获得性放射抵抗细胞株具备更强的放射后克隆形成能力. | 第63-64页 |
2.4 获得性放射抵抗细胞株具备更强的抗放射后凋亡能力.. | 第64-65页 |
2.5 获得性放射抵抗细胞株具备更强的放射后分裂能力 | 第65-66页 |
2.6 获得性放射抵抗细胞株具备更强的放射后迁移能力 | 第66-67页 |
2.7 获得性放射抵抗细胞株具备更强的放射后微球形成能力 | 第67-68页 |
3 讨论 | 第68-70页 |
4 结论 | 第70-71页 |
参考文献 | 第71-73页 |
第三部分 获得性放射抵抗相关的差异表达基因鉴定 | 第73-91页 |
1 材料与方法 | 第73-81页 |
1.1 材料 | 第73-78页 |
1.1.1 组织标本来源 | 第73-74页 |
1.1.2 组织样本的收集 | 第74页 |
1.1.3 分组标准 | 第74页 |
1.1.4 细胞株 | 第74页 |
1.1.5 主要试剂 | 第74页 |
1.1.6 主要仪器 | 第74-75页 |
1.1.7 引物 | 第75-78页 |
1.2 方法 | 第78-81页 |
1.2.1 细胞总RNA的提取 | 第78页 |
1.2.2 组织总RNA的提取 | 第78-79页 |
1.2.3 反转录制备cDNA | 第79页 |
1.2.4 qRT-PCR | 第79-80页 |
1.2.5 免疫组化 | 第80页 |
1.2.6 统计分析 | 第80-81页 |
2 结果 | 第81-86页 |
2.1 放射抗性相关基因筛选 | 第81-82页 |
2.2 组织样本中验证qRT-PCR-array结果 | 第82-85页 |
2.3 在宫颈癌放疗抗拒组织中GADD45A蛋白表达降低 | 第85-86页 |
3 讨论 | 第86-88页 |
4 结论 | 第88-89页 |
参考文献 | 第89-91页 |
第四部分 GADD45A过表达恢复获得性放射抵抗宫颈癌细胞的放疗敏感性 | 第91-101页 |
1 材料与方法 | 第91-95页 |
1.1 材料 | 第91-92页 |
1.1.1 细胞株 | 第91页 |
1.1.2 实验试剂 | 第91-92页 |
1.1.3 主要仪器及设备 | 第92页 |
1.2 实验方法 | 第92-95页 |
1.2.1 重组载体的构建 | 第92页 |
1.2.2 病毒包装与细胞感染 | 第92页 |
1.2.3 Western blot | 第92-93页 |
1.2.4 转染后细胞存活能力检测 | 第93页 |
1.2.5 转染后细胞克隆形成能力检测 | 第93页 |
1.2.6 转染后细胞凋亡能力检测 | 第93-94页 |
1.2.7 转染后细胞侵袭能力检测 | 第94页 |
1.2.8 转染后细胞增殖能力检测 | 第94-95页 |
2 结果 | 第95-96页 |
2.1 验证Hela/R-GADD45A和 Sha/R-GADD45A细胞 | 第95页 |
2.2 GADD45A过表达恢复抗性细胞株的放射敏感性 | 第95-96页 |
3 讨论 | 第96-98页 |
4 结论 | 第98-99页 |
参考文献 | 第99-101页 |
第五部分 GADD45A沉默诱导亲本细胞株的放疗抵抗 | 第101-112页 |
1 材料与方法 | 第101-105页 |
1.1 材料 | 第101-102页 |
1.1.1 细胞株 | 第101页 |
1.1.2 实验试剂 | 第101页 |
1.1.3 主要仪器及设备 | 第101-102页 |
1.2 实验方法 | 第102-105页 |
1.2.1 重组载体的构建 | 第102页 |
1.2.2 病毒包装与细胞感染 | 第102-103页 |
1.2.3 qRT-PCR | 第103页 |
1.2.4 Western blot | 第103页 |
1.2.5 转染后细胞存活能力检测 | 第103页 |
1.2.6 转染后细胞克隆形成能力检测 | 第103-104页 |
1.2.7 转染后细胞凋亡能力检测 | 第104页 |
1.2.8 转染后细胞侵袭能力检测 | 第104-105页 |
1.2.9 转染后细胞增殖能力检测 | 第105页 |
2 结果 | 第105-107页 |
2.1 验证GADD45A沉默细胞 | 第105-106页 |
2.2 GADD45A沉默诱导宫颈癌细胞的放射抵抗能力 | 第106-107页 |
3 讨论 | 第107-109页 |
4 结论 | 第109-110页 |
参考文献 | 第110-112页 |
第六部分 GADD45A调控宫颈癌放疗敏感性的分子机制 | 第112-122页 |
1 材料与方法 | 第112-114页 |
1.1 材料 | 第112-113页 |
1.1.1 细胞株 | 第112页 |
1.1.2 实验试剂 | 第112页 |
1.1.3 主要仪器 | 第112-113页 |
1.2 实验方法 | 第113-114页 |
1.2.1 生物信息学方法 | 第113页 |
1.2.2 qRT-PCR | 第113页 |
1.2.3 Western blot | 第113页 |
1.2.4 CCK-8 法检测细胞存活能力 | 第113-114页 |
1.2.5 荧光素酶报告基因 | 第114页 |
1.2.6 ChIP-PCR | 第114页 |
2 结果 | 第114-119页 |
2.1 生物信息学分析提示GADD45A调控PI3K/AKT信号通路. | 第114-115页 |
2.2 生物信息学提示GADD45A负反馈调控FGFR4 | 第115-117页 |
2.3 GADD45A通过直接结合FGFR4 启动子区负反馈调节FGFR4和PI3K/AKT信号通路 | 第117-119页 |
3 讨论 | 第119-120页 |
4 结论 | 第120-121页 |
参考文献 | 第121-122页 |
全文小结 | 第122-124页 |
全文创新点 | 第124-125页 |
本研究存在的问题 | 第125-126页 |
附录 | 第126-128页 |
缩略语表 | 第126-128页 |
综述 GADD45家族:潜在的癌症治疗靶点 | 第128-138页 |
1 DNA甲基化与癌症 | 第128-129页 |
2 GADD45 基因家族在癌症中的重要作用 | 第129-132页 |
3 甲基化在基因表达中的重要作用 | 第132-134页 |
参考文献 | 第134-138页 |
致谢 | 第138-141页 |
学习期间已发表论文 | 第141页 |