| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言与文献综述 | 第11-29页 |
| 1.1 甘蔗简介 | 第11-12页 |
| 1.2 甘蔗主要害虫及其防治方法 | 第12-18页 |
| 1.2.1 甘蔗害虫种类及其危害 | 第12-17页 |
| 1.2.2 甘蔗害虫综合防治技术 | 第17-18页 |
| 1.3 Bt抗虫基因研究进展 | 第18-23页 |
| 1.3.1 Bt杀虫蛋白来源 | 第19页 |
| 1.3.2 Bt杀虫蛋白基因的分类 | 第19页 |
| 1.3.3 Bt杀虫蛋白的抗虫机理 | 第19-20页 |
| 1.3.4 转Bt基因植物的研究 | 第20-22页 |
| 1.3.5 植物转Bt基因工程中潜在的问题及解决途径 | 第22-23页 |
| 1.4 甘蔗转基因研究进展 | 第23-27页 |
| 1.4.1 抗病转基因甘蔗 | 第23页 |
| 1.4.2 抗病毒转基因甘蔗 | 第23-24页 |
| 1.4.3 抗虫转基因甘蔗 | 第24-26页 |
| 1.4.4 抗逆境转基因甘蔗 | 第26页 |
| 1.4.5 抗除草剂转基因甘蔗 | 第26页 |
| 1.4.6 提高蔗糖含量转基因甘蔗 | 第26-27页 |
| 1.5 本研究的目的意义、内容及技术路线 | 第27-29页 |
| 1.5.1 研究目的意义 | 第27页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第27-28页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-45页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第29-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第29页 |
| 2.1.3 酶和生物试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第29-30页 |
| 2.1.5 培养基配制 | 第30页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第30-31页 |
| 2.2 Cry1Ac基因原核表达 | 第31-33页 |
| 2.2.1 Cry1Ac基因原核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.2 融合蛋白的表达与表达模式的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.3 融合蛋白的纯化 | 第33页 |
| 2.3 TO代转基因甘蔗植株分子检测 | 第33-38页 |
| 2.3.1 转化植株PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.3.2 转基因甘蔗植株Bar免疫/检测试纸条检测 | 第34页 |
| 2.3.3 转基因甘蔗植株Southern Blot检测 | 第34-37页 |
| 2.3.4 转基因甘蔗植株RT-PCR检测 | 第37-38页 |
| 2.3.5 转基因甘蔗植株Bt免疫检测试纸条检测 | 第38页 |
| 2.4 TO代转基因甘蔗植株抗虫性鉴定与评价 | 第38-39页 |
| 2.4.1 转基因甘蔗室内抗虫性鉴定及评价 | 第38-39页 |
| 2.4.2 转基因甘蔗大田抗虫性鉴定及评价 | 第39页 |
| 2.5 T1代抗虫转基因株系的分子检测与表达分析 | 第39-43页 |
| 2.5.1 抗虫转基因株系的PCR检测 | 第39页 |
| 2.5.2 抗虫转基因株系的Southern blot检测 | 第39页 |
| 2.5.3 抗虫转基因株系Cry1Ac基因RT-qPCR扩增及数据分析 | 第39-40页 |
| 2.5.4 抗虫转基因株系Western Blot检测 | 第40-42页 |
| 2.5.5 抗虫转基因甘蔗株系ELISA检测 | 第42-43页 |
| 2.6 T1代抗虫转基因株系抗虫稳定性鉴定 | 第43页 |
| 2.6.1 抗虫转基因株系室内抗虫性鉴定 | 第43页 |
| 2.6.2 抗虫转基因株系大田抗虫性鉴定 | 第43页 |
| 2.7 T1代抗虫转基因株系田间农艺性状测量与分析 | 第43-45页 |
| 2.7.1 抗虫转基因株系田间农艺性状测量 | 第43-44页 |
| 2.7.2 抗虫转基因株系田间农艺性状分析 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-61页 |
| 3.1 Cry1Ac基因的原核表达 | 第45-46页 |
| 3.3.1 Cry1Ac基因的原核表达载体pCznl-Cry1Ac的构建 | 第45页 |
| 3.3.2 融合蛋白Cry1Ac-His的小量表达与表达模式的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.3 融合蛋白Cry1Ac-His的纯化 | 第46页 |
| 3.2 T0代不同抗虫性转基因甘蔗植株的筛选 | 第46-54页 |
| 3.2.1 转基因甘蔗植株PCR检测 | 第47页 |
| 3.2.2 转基因甘蔗植株Bar免疫/检测试纸条检测 | 第47-48页 |
| 3.2.3 转基因甘蔗植株Southern blot检测 | 第48-50页 |
| 3.2.4 转基因甘蔗植株RT-PCR检测 | 第50-51页 |
| 3.2.5 转基因甘蔗植株Bt免疫/检测试纸条检测 | 第51页 |
| 3.2.6 转基因甘蔗植株室内抗虫性鉴定及评价 | 第51-53页 |
| 3.2.7 转基因甘蔗植株大田抗虫性鉴定及评价 | 第53页 |
| 3.2.8 TO代优良抗虫转基因甘蔗植株的获得 | 第53-54页 |
| 3.3 T1代抗虫转基因株系分子检测、蛋白表达及抗虫性分析 | 第54-59页 |
| 3.3.1 T1代抗虫转基因株系PCR检测 | 第54页 |
| 3.3.2 T1代抗虫转基因株系Southern blot检测 | 第54-55页 |
| 3.3.3 T1代抗虫转基因株系Cry1Ac基因的RT-qPCR分析 | 第55-56页 |
| 3.3.4 T1代抗虫转基因株系的Western blot | 第56-57页 |
| 3.3.5 T1代抗虫转基因株系的ELISA分析 | 第57页 |
| 3.3.6 T1代抗虫转基因株系室内抗虫性鉴定与分析 | 第57-58页 |
| 3.3.7 T1代抗虫转基因株系大田抗虫性鉴定与分析 | 第58-59页 |
| 3.4 T1代抗虫转基因株系主要农艺性状的测定与分析 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| 4.1 抗虫转基因株系的筛选 | 第61页 |
| 4.2 转基因甘蔗株系快速PCR鉴定 | 第61-62页 |
| 4.3 转基因甘蔗株系Souhern杂交 | 第62页 |
| 4.4 转基因甘蔗株系抗虫性鉴定 | 第62-63页 |
| 4.5 转基因甘蔗株系Bt蛋白表达与抗虫性分析 | 第63页 |
| 4.6 转Bt基因对甘蔗田间农艺性状的影响 | 第63-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 6 本研究的后续工作 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
