| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒病疫苗研究进展 | 第11-39页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征 | 第11-20页 |
| 1.1 病毒基因组结构 | 第11-12页 |
| 1.2 PRRSV编码蛋白 | 第12-14页 |
| 1.2.1 GP5蛋白 | 第12-13页 |
| 1.2.2 M蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3 免疫特性 | 第14-16页 |
| 1.4 商品化疫苗 | 第16-17页 |
| 1.5 新型疫苗研究 | 第17-20页 |
| 1.5.1 亚单位疫苗 | 第17页 |
| 1.5.2 复制缺陷型病毒载体疫苗 | 第17-18页 |
| 1.5.3 复制型病毒载体疫苗 | 第18-19页 |
| 1.5.4 DNA疫苗 | 第19页 |
| 1.5.5 标记疫苗 | 第19-20页 |
| 1.5.6 PRRSV反向遗传技术在疫苗研究中的应用 | 第20页 |
| 2 猪圆环病毒2型 | 第20-27页 |
| 2.1 PCV2基因组结构 | 第21页 |
| 2.2 Cap蛋白 | 第21-22页 |
| 2.3 PMWS | 第22-23页 |
| 2.4 PCV2感染引起的宿主免疫应答 | 第23页 |
| 2.5 PCV2商品化疫苗 | 第23-27页 |
| 2.5.1 灭活疫苗 | 第25页 |
| 2.5.2 亚单位疫苗 | 第25页 |
| 2.5.3 DNA疫苗 | 第25-26页 |
| 2.5.4 PCV2嵌合VLPs | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-39页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型猪体共感染发病模型的建立 | 第39-53页 |
| 1 材料与方法 | 第40-44页 |
| 1.1 细胞和病毒 | 第40页 |
| 1.2 试剂 | 第40页 |
| 1.3 实验设计 | 第40页 |
| 1.4 临床症状统计 | 第40-41页 |
| 1.5 Real-time PCR检测淋巴结和血清中PCV2 DNA的含量 | 第41-42页 |
| 1.5.1 样品DNA的提取 | 第41页 |
| 1.5.2 SYBR Green实时PCR | 第41-42页 |
| 1.6 Real-time PCR检测肺脏和血清中PRRSV RNA的含量 | 第42-43页 |
| 1.6.1 样品总RNA的提取 | 第42页 |
| 1.6.2 逆转录 | 第42页 |
| 1.6.3 SYBR Green实时PCR | 第42-43页 |
| 1.7 病理学观察 | 第43页 |
| 1.7.1 病理组织切片制备方法 | 第43页 |
| 1.7.2 组织切片染色方法 | 第43页 |
| 1.8 数据统计分析 | 第43-44页 |
| 2 结果 | 第44-48页 |
| 2.1 临床症状 | 第44-45页 |
| 2.2 肉眼病理变化 | 第45-46页 |
| 2.3 组织病理学变化 | 第46-47页 |
| 2.4 病毒血症 | 第47-48页 |
| 2.5 肺脏和淋巴结中病毒载量 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒0RF5和ORF6基因在昆虫细胞中的表达 | 第53-73页 |
| 1 材料与方法 | 第54-63页 |
| 1.1 质粒、菌株、细胞和试剂 | 第54页 |
| 1.2 五种重组载体质粒构建思路 | 第54-55页 |
| 1.3 目的基因片段的扩增 | 第55-57页 |
| 1.3.1 天然的GP5基因片段的扩增 | 第55页 |
| 1.3.2 GP5(35/44)(his)基因片段的扩增 | 第55-56页 |
| 1.3.3 M(flag)基因片段的扩增 | 第56页 |
| 1.3.4 GP5m基因片段的扩增 | 第56页 |
| 1.3.5 PCR | 第56-57页 |
| 1.4 目的基因的回收和纯化 | 第57页 |
| 1.5 PCR产物的酶切与纯化 | 第57-58页 |
| 1.6 目的基因克隆入载体质粒 | 第58-60页 |
| 1.6.1 酶切片段连接酶切质粒 | 第58页 |
| 1.6.2 DH5α感受态的制备与转化 | 第58-59页 |
| 1.6.3 重组载体质粒的小量提取 | 第59页 |
| 1.6.4 重组载体质粒的鉴定 | 第59-60页 |
| 1.6.5 p10-GP5(35/44)+PH-M质粒的构建 | 第60页 |
| 1.7 重组Bacmid的构建 | 第60-61页 |
| 1.7.1 位点特异性转座 | 第60页 |
| 1.7.2 二次筛选 | 第60页 |
| 1.7.3 重组Bacmid的提取 | 第60-61页 |
| 1.8 重组杆状病毒的获取与扩增 | 第61-62页 |
| 1.8.1 重组Bacmid转染Sf9细胞 | 第61页 |
| 1.8.2 重组杆状病毒的获得与扩增 | 第61-62页 |
| 1.9 重组蛋白的鉴定 | 第62-63页 |
| 1.9.1 Western blot鉴定重组蛋白 | 第62页 |
| 1.9.2 间接免疫荧光(IFA)鉴定重组蛋白 | 第62-63页 |
| 2 结果 | 第63-68页 |
| 2.1 目的基因的获取 | 第63页 |
| 2.2 重组供体质粒的构建与双酶切鉴定 | 第63-64页 |
| 2.3 重组杆状病毒的获得 | 第64-65页 |
| 2.4 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第65-67页 |
| 2.5 重组蛋白的IFA鉴定 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒病二联疫苗免疫保护效力研究 | 第73-89页 |
| 1 材料与方法 | 第74-77页 |
| 1.1 细胞、病毒和蛋白 | 第74页 |
| 1.2 试剂 | 第74页 |
| 1.3 疫苗制备 | 第74-75页 |
| 1.3.1 PRRSV+Cap疫苗的制备 | 第74-75页 |
| 1.3.2 GP5+M+Cap疫苗的制备 | 第75页 |
| 1.4 猪体免疫保护试验 | 第75-77页 |
| 1.4.1 PRRSV特异性ELISA抗体的测定 | 第75-76页 |
| 1.4.2 PCV2特异性ELISA抗体的测定 | 第76页 |
| 1.4.3 PRRSV中和抗体的测定 | 第76页 |
| 1.4.4 PCV2中和抗体的测定 | 第76页 |
| 1.4.5 临床症状统计 | 第76-77页 |
| 1.4.6 Realtime-PCR检测PCV2 | 第77页 |
| 1.4.7 Real-time PCR检测PRRSV | 第77页 |
| 1.4.8 病理学观察 | 第77页 |
| 1.5 数据分析 | 第77页 |
| 2 结果 | 第77-84页 |
| 2.1 ELISA抗体 | 第77-78页 |
| 2.2 中和抗体 | 第78页 |
| 2.3 临床症状 | 第78-80页 |
| 2.4 相对日增重(RDWG) | 第80-81页 |
| 2.5 肉眼病理变化 | 第81-82页 |
| 2.6 肺脏和淋巴结组织病理学变化 | 第82页 |
| 2.7 病毒血症 | 第82-83页 |
| 2.8 肺脏和淋巴结中病毒载量 | 第83-84页 |
| 3 讨论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-89页 |
| 全文总结 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
