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ScPif1解旋酶的结构与功能研究

摘要第6-8页
ABSTRACT第8-9页
主要符号对照表第10-14页
第一章 文献综述第14-43页
    1.1 解旋酶简述第14-19页
        1.1.1 解旋酶的特性第15-18页
        1.1.2 解旋酶的分类第18-19页
    1.2 SF1家族解旋酶第19-24页
        1.2.1 SF1解旋酶的分类第19-21页
        1.2.2 解旋酶SF1家族的保守基序第21-23页
        1.2.3 解旋酶SF1家族典型成员的结构与功能研究第23-24页
    1.3 Pif1家族解旋酶研究进展第24-39页
        1.3.1 Pif1家族解旋酶概述第24-25页
        1.3.2 Pif1的端粒调节功能第25-27页
        1.3.3 Pif1的G4 DNA解旋功能第27-34页
        1.3.4 Pif1对冈崎片段成熟的促进作用第34-36页
        1.3.5 Pif1在DSB损伤修复中的功能第36-38页
        1.3.6 Pif1对tDNA和rDNA复制的调控作用第38-39页
    1.4 解旋酶研究技术第39-42页
        1.4.1 解旋酶的底物结合活性测定技术第39-40页
        1.4.2 解旋酶的解旋活力测定技术第40-41页
        1.4.3 解旋酶的聚集形态分析技术第41-42页
    1.5 研究目的和意义第42-43页
第二章 ScPif1的表达纯化与活性鉴定第43-67页
    引言第43页
    2.1 实验材料、仪器、试剂第43-45页
        2.1.1 实验材料第43-45页
        2.1.2 实验试剂第45页
        2.1.3 实验仪器第45页
    2.2 实验方法第45-52页
        2.2.1 ScPif1的序列生物信息学分析第45-46页
        2.2.2 ScPif1的载体构建第46-48页
        2.2.3 ScPif1的表达与纯化第48-50页
        2.2.4 ScPif1的聚集状态和均一性分析第50-51页
        2.2.5 ScPif1的基本生化性质测定第51-52页
    2.3 实验结果第52-65页
        2.3.1 ScPif1的序列生物信息学分析结果第52-55页
        2.3.2 ScPif1的载体构建和表达纯化结果第55-58页
        2.3.3 ScPif1的聚集状态和均一性分析结果第58-59页
        2.3.4 ScPif1的基本生化活性检测结果第59-65页
    2.4 小结与讨论第65-67页
第三章 ScPif1的晶体结构研究第67-96页
    引言第67页
    3.1 实验材料、仪器、试剂第67-69页
        3.1.1 实验材料和试剂第67-68页
        3.1.2 实验仪器第68-69页
    3.2 实验方法第69-73页
        3.2.1 实验主要缓冲溶液的成分第69-70页
        3.2.2 ScPif1~(237-780) 结晶实验的样品准备第70页
        3.2.3 ScPif1~(237-780) 结晶实验第70页
        3.2.4 ScPif1~(237-780) 的晶体结构的解析第70-71页
        3.2.5 小角X射线散射实验第71-72页
        3.2.6 荧光各向异性法,动态光散射实验和凝胶过滤实验第72页
        3.2.7 圆二色旋光分光法测定实验第72页
        3.2.8 单分子荧光共振能量转移实验第72-73页
    3.3 实验结果第73-94页
        3.3.1 ScPif1~(237-780) 的单蛋白结晶实验第73-74页
        3.3.2 ScPif1~(237-780) 的单链DNA复合结晶实验第74-79页
        3.3.3 ScPif1~(237-780) 与G4 DNA和Fork dsDNA的复合结晶实验第79-80页
        3.3.4 ScPif1~(237-780) 与单链DNA复合物晶体结构的解析第80-82页
        3.3.5 ScPif1~(237-780) 与单链DNA复合物的晶体结构初步分析第82-84页
        3.3.6 ScPif1~(237-780) 活性状态二聚体的验证第84-94页
    3.4 小结与讨论第94-96页
第四章 基于ScPif1结构的功能研究第96-121页
    引言第96页
    4.1 实验材料、仪器、试剂第96-97页
        4.1.1 实验材料和试剂第96-97页
        4.1.2 实验仪器第97页
    4.2 实验方法第97页
        4.2.1 突变体蛋白样品的准备第97页
        4.2.2 DNA结合活性的测定实验第97页
        4.2.3 解旋活性和易位活性的测定实验第97页
    4.3 实验结果第97-119页
        4.3.1 ScPif1~(237-780) 核苷酸结合位点的结构与功能研究第97-100页
        4.3.2 ScPif1~(237-780) 的单链DNA结合位点结构研究第100-106页
        4.3.3 ScPif1~(237-780) 的 2C结构域结构分析与功能验证第106-113页
        4.3.4 ScPif1~(237-780) 中G4 DNA结合位点的鉴定第113-119页
    4.4 小结与讨论第119-121页
第五章 结论与创新点第121-123页
    5.1 结论第121-122页
    5.2 创新点第122-123页
参考文献第123-138页
附录第138-146页
致谢第146-147页
作者简介第147页

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