摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
主要符号对照表 | 第10-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-43页 |
1.1 解旋酶简述 | 第14-19页 |
1.1.1 解旋酶的特性 | 第15-18页 |
1.1.2 解旋酶的分类 | 第18-19页 |
1.2 SF1家族解旋酶 | 第19-24页 |
1.2.1 SF1解旋酶的分类 | 第19-21页 |
1.2.2 解旋酶SF1家族的保守基序 | 第21-23页 |
1.2.3 解旋酶SF1家族典型成员的结构与功能研究 | 第23-24页 |
1.3 Pif1家族解旋酶研究进展 | 第24-39页 |
1.3.1 Pif1家族解旋酶概述 | 第24-25页 |
1.3.2 Pif1的端粒调节功能 | 第25-27页 |
1.3.3 Pif1的G4 DNA解旋功能 | 第27-34页 |
1.3.4 Pif1对冈崎片段成熟的促进作用 | 第34-36页 |
1.3.5 Pif1在DSB损伤修复中的功能 | 第36-38页 |
1.3.6 Pif1对tDNA和rDNA复制的调控作用 | 第38-39页 |
1.4 解旋酶研究技术 | 第39-42页 |
1.4.1 解旋酶的底物结合活性测定技术 | 第39-40页 |
1.4.2 解旋酶的解旋活力测定技术 | 第40-41页 |
1.4.3 解旋酶的聚集形态分析技术 | 第41-42页 |
1.5 研究目的和意义 | 第42-43页 |
第二章 ScPif1的表达纯化与活性鉴定 | 第43-67页 |
引言 | 第43页 |
2.1 实验材料、仪器、试剂 | 第43-45页 |
2.1.1 实验材料 | 第43-45页 |
2.1.2 实验试剂 | 第45页 |
2.1.3 实验仪器 | 第45页 |
2.2 实验方法 | 第45-52页 |
2.2.1 ScPif1的序列生物信息学分析 | 第45-46页 |
2.2.2 ScPif1的载体构建 | 第46-48页 |
2.2.3 ScPif1的表达与纯化 | 第48-50页 |
2.2.4 ScPif1的聚集状态和均一性分析 | 第50-51页 |
2.2.5 ScPif1的基本生化性质测定 | 第51-52页 |
2.3 实验结果 | 第52-65页 |
2.3.1 ScPif1的序列生物信息学分析结果 | 第52-55页 |
2.3.2 ScPif1的载体构建和表达纯化结果 | 第55-58页 |
2.3.3 ScPif1的聚集状态和均一性分析结果 | 第58-59页 |
2.3.4 ScPif1的基本生化活性检测结果 | 第59-65页 |
2.4 小结与讨论 | 第65-67页 |
第三章 ScPif1的晶体结构研究 | 第67-96页 |
引言 | 第67页 |
3.1 实验材料、仪器、试剂 | 第67-69页 |
3.1.1 实验材料和试剂 | 第67-68页 |
3.1.2 实验仪器 | 第68-69页 |
3.2 实验方法 | 第69-73页 |
3.2.1 实验主要缓冲溶液的成分 | 第69-70页 |
3.2.2 ScPif1~(237-780) 结晶实验的样品准备 | 第70页 |
3.2.3 ScPif1~(237-780) 结晶实验 | 第70页 |
3.2.4 ScPif1~(237-780) 的晶体结构的解析 | 第70-71页 |
3.2.5 小角X射线散射实验 | 第71-72页 |
3.2.6 荧光各向异性法,动态光散射实验和凝胶过滤实验 | 第72页 |
3.2.7 圆二色旋光分光法测定实验 | 第72页 |
3.2.8 单分子荧光共振能量转移实验 | 第72-73页 |
3.3 实验结果 | 第73-94页 |
3.3.1 ScPif1~(237-780) 的单蛋白结晶实验 | 第73-74页 |
3.3.2 ScPif1~(237-780) 的单链DNA复合结晶实验 | 第74-79页 |
3.3.3 ScPif1~(237-780) 与G4 DNA和Fork dsDNA的复合结晶实验 | 第79-80页 |
3.3.4 ScPif1~(237-780) 与单链DNA复合物晶体结构的解析 | 第80-82页 |
3.3.5 ScPif1~(237-780) 与单链DNA复合物的晶体结构初步分析 | 第82-84页 |
3.3.6 ScPif1~(237-780) 活性状态二聚体的验证 | 第84-94页 |
3.4 小结与讨论 | 第94-96页 |
第四章 基于ScPif1结构的功能研究 | 第96-121页 |
引言 | 第96页 |
4.1 实验材料、仪器、试剂 | 第96-97页 |
4.1.1 实验材料和试剂 | 第96-97页 |
4.1.2 实验仪器 | 第97页 |
4.2 实验方法 | 第97页 |
4.2.1 突变体蛋白样品的准备 | 第97页 |
4.2.2 DNA结合活性的测定实验 | 第97页 |
4.2.3 解旋活性和易位活性的测定实验 | 第97页 |
4.3 实验结果 | 第97-119页 |
4.3.1 ScPif1~(237-780) 核苷酸结合位点的结构与功能研究 | 第97-100页 |
4.3.2 ScPif1~(237-780) 的单链DNA结合位点结构研究 | 第100-106页 |
4.3.3 ScPif1~(237-780) 的 2C结构域结构分析与功能验证 | 第106-113页 |
4.3.4 ScPif1~(237-780) 中G4 DNA结合位点的鉴定 | 第113-119页 |
4.4 小结与讨论 | 第119-121页 |
第五章 结论与创新点 | 第121-123页 |
5.1 结论 | 第121-122页 |
5.2 创新点 | 第122-123页 |
参考文献 | 第123-138页 |
附录 | 第138-146页 |
致谢 | 第146-147页 |
作者简介 | 第147页 |