| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 异位骨化 | 第12-22页 |
| 1.1.1 异位骨化的定义 | 第12页 |
| 1.1.2 异位骨化的分类及发生率 | 第12-13页 |
| 1.1.3 异位骨化的分型及分期 | 第13-16页 |
| 1.1.4 异位骨化的发病机制 | 第16-17页 |
| 1.1.5 异位骨化的治疗 | 第17-22页 |
| 1.2 ENDMT过程与异位骨化 | 第22-23页 |
| 1.3 MIRNA调控细胞分化 | 第23页 |
| 1.4 BMP7与TGF-Β通路 | 第23-24页 |
| 1.5 本章小结 | 第24-25页 |
| 第二章 MIRNA-542-3P在异位骨化临床样本及动物模型中的表达及其生物学意义 | 第25-39页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验仪器与材料 | 第25-26页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.3.1 MiRNA靶向BMP7的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.3.2 靶基因验证 | 第27-30页 |
| 2.3.3 细胞转染 | 第30页 |
| 2.3.4 大鼠跟腱损伤HO实验模型的建立 | 第30-31页 |
| 2.3.5 RT-PCR测定miR-542-3p在异位骨化组织中的表达 | 第31页 |
| 2.3.6 Western blot检测蛋白水平 | 第31页 |
| 2.3.7 统计学方法 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-37页 |
| 2.4.1 生物信息学软件预测靶向BMP7的miRNA | 第32页 |
| 2.4.2 MiR-542-3p可以直接结合于BMP73'端非编码区 | 第32-35页 |
| 2.4.3 异位骨化临床样本中miR-542-3p和BMP7的表达 | 第35-36页 |
| 2.4.4 大鼠跟腱损伤HO实验模型中miR-542-3p和BMP7的表达 | 第36-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 2.6 结论 | 第38-39页 |
| 第三章 MIRNA慢病毒载体构建及有效性评价 | 第39-52页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验仪器与材料 | 第39-40页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 3.3.1 质粒构建 | 第40-43页 |
| 3.3.2 慢病毒包装 | 第43-45页 |
| 3.3.3 RNA的提取和逆转录 | 第45-46页 |
| 3.4 实验结果 | 第46-50页 |
| 3.4.1 PCR扩增目的片段 | 第46页 |
| 3.4.2 阳性克隆筛选结果 | 第46-47页 |
| 3.4.3 测序结果分析 | 第47-48页 |
| 3.4.4 慢病毒滴度检测 | 第48页 |
| 3.4.5 慢病毒有效性检测 | 第48-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-51页 |
| 3.6 结论 | 第51-52页 |
| 第四章 MIRNA-542-3P抑制ENDMT过程及相关机制研究 | 第52-69页 |
| 4.1 引言 | 第52-53页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第53-54页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第53页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第53-54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.3.1 慢病毒滴度测定 | 第54页 |
| 4.3.2 慢病毒感染 | 第54页 |
| 4.3.3 Western blot检测蛋白水平 | 第54页 |
| 4.3.4 RNA的提取和逆转录 | 第54页 |
| 4.3.5 Real-time PCR(qPCR) | 第54-56页 |
| 4.4 实验结果 | 第56-66页 |
| 4.4.1 MiRNA-542-3p对TGF-β诱导EndMT过程的影响 | 第56-61页 |
| 4.4.2 MiRNA-542-3p在内皮细胞中对TGF-β通路的影响 | 第61-62页 |
| 4.4.3 MiRNA-542-3p在内皮细胞中对MAPK通路的影响 | 第62-64页 |
| 4.4.4 MiRNA-542-3p对EndMT过程的调控作用受MAPK通路影响 | 第64-65页 |
| 4.4.5 异位骨化临床样本中MAPK通路的表达 | 第65-66页 |
| 4.5 讨论 | 第66-68页 |
| 4.6 结论 | 第68-69页 |
| 第五章 大鼠跟腱损伤HO模型局部注射MIRNA-542-3P抑制慢病毒的实验研究 | 第69-77页 |
| 5.1 引言 | 第69页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第69-70页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第69页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第69页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第69-70页 |
| 5.3 实验方法 | 第70-71页 |
| 5.3.1 大鼠跟腱损伤HO实验模型的建立 | 第70页 |
| 5.3.2 大鼠跟腱损伤HO模型局部注射miR-542-3p抑制慢病毒颗粒的实验研究 | 第70-71页 |
| 5.3.3 Western blot检测蛋白水平 | 第71页 |
| 5.3.4 RT-PCR检测m RNA水平 | 第71页 |
| 5.4 实验结果 | 第71-75页 |
| 5.4.1 大鼠跟腱损伤HO实验模型的建立 | 第71-72页 |
| 5.4.2 X线检查结果 | 第72页 |
| 5.4.3 免疫组化检测组织中细胞标志蛋白含量结果 | 第72-73页 |
| 5.4.4 Western blot检测组织中细胞标志蛋白相对含量结果 | 第73-75页 |
| 5.4.5 RT-PCR检测组织中细胞标志物m RNA相对含量结果 | 第75页 |
| 5.5 讨论 | 第75-76页 |
| 5.6 结论 | 第76-77页 |
| 第六章 结论与展望 | 第77-78页 |
| 6.1 主要结论 | 第77页 |
| 6.2 研究展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录 缩写 | 第85-86页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第86-88页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
