| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 文献回顾 | 第18-30页 |
| 第一部分 mtSSB在结直肠癌中的表达及其临床意义 | 第30-41页 |
| 1 材料 | 第30-32页 |
| 1.1 研究对象 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第30-31页 |
| 1.3 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-37页 |
| 2.1 提取样本组织总RNA和反转录 | 第32-33页 |
| 2.2 实时定量PCR反应实验 | 第33-34页 |
| 2.3 组织蛋白质的提取 | 第34页 |
| 2.4 BCA蛋白定量 | 第34页 |
| 2.5 Western blot实验检测结直肠癌组织mtSSB表达 | 第34-35页 |
| 2.6 免疫组织化学染色实验 | 第35-36页 |
| 2.7 统计分析 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-39页 |
| 3.1 结直肠癌组织样本分析mtSSB的表达差异 | 第37页 |
| 3.2 mtSSB表达高低与结直肠癌患者预后的相关性分析 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第二部分 mtSSB调控结直肠癌细胞生长的生物学作用研究 | 第41-56页 |
| 1 材料 | 第41-43页 |
| 1.1 研究对象 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第41-42页 |
| 1.3 主要仪器 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-50页 |
| 2.1 细胞培养 | 第43页 |
| 2.2 mtSSB过表达质粒载体构建 | 第43-46页 |
| 2.3 shRNA干涉质粒构建 | 第46页 |
| 2.4 CRC细胞转染 | 第46-48页 |
| 2.5 稳转细胞筛选 | 第48页 |
| 2.6 检测mtSSB过表达和干涉效果 | 第48页 |
| 2.7 细胞计数方法检测细胞数目 | 第48页 |
| 2.8 EDU检测细胞增殖 | 第48页 |
| 2.9 克隆形成的检测 | 第48-49页 |
| 2.10 Western blot实验 | 第49页 |
| 2.11 裸鼠皮下成瘤实验 | 第49页 |
| 2.12 HE染色 | 第49页 |
| 2.13 IHC染色 | 第49页 |
| 2.14 统计学分析 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-54页 |
| 3.1 mtSSB在不同结直肠癌细胞系中表达情况 | 第50页 |
| 3.2 检测mtSSB在结直肠癌细胞中的过表达和干涉效果 | 第50-51页 |
| 3.3 体外实验检测mtSSB对结直肠癌细胞增殖的影响 | 第51-53页 |
| 3.4 体内实验检测mtSSB对结直肠癌细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第三部分 mtSSB调控结直肠癌细胞生长的机制研究 | 第56-76页 |
| 1 材料 | 第56-58页 |
| 1.1 研究对象 | 第56页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第56-57页 |
| 1.3 主要仪器 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-64页 |
| 2.1 提取基因组DNA | 第58-59页 |
| 2.2 实时定量PCR检测mtDNA拷贝数 | 第59-60页 |
| 2.3 透射电镜观察并统计线粒体数目 | 第60页 |
| 2.4 线粒体氧耗实验 | 第60-61页 |
| 2.5 ATP生成实验 | 第61页 |
| 2.6 端粒酶活性检测 | 第61-62页 |
| 2.7 实时定量PCR检测端粒长度 | 第62-64页 |
| 2.8 ROS含量检测 | 第64页 |
| 3 结果 | 第64-73页 |
| 3.1 mtSSB对结直肠癌细胞中mtDNA拷贝数的影响 | 第64-65页 |
| 3.2 mtSSB对结直肠癌细胞中线粒体数目的影响 | 第65-67页 |
| 3.3 结直肠癌临床样本中检测mtSSB对线粒体数目和mtDNA拷贝数的影响 | 第67页 |
| 3.4 mtSSB对结直肠癌细胞线粒体氧化磷酸化功能的影响 | 第67-68页 |
| 3.5 mtSSB对结直肠癌细胞线粒体ATP生成的影响 | 第68-69页 |
| 3.6 mtSSB对结直肠癌细胞端粒酶活性的影响 | 第69页 |
| 3.7 mtSSB对结直肠癌细胞端粒长度的影响 | 第69-70页 |
| 3.8 mtSSB对结直肠癌细胞ROS水平的影响 | 第70-72页 |
| 3.10 mtSSB干涉后加H2O2对结直肠癌细胞端粒酶活性和端粒长度影响 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-76页 |
| 第四部分 调控结直肠癌细胞mtSSB表达的机制研究 | 第76-92页 |
| 1 材料 | 第76-78页 |
| 1.1 研究对象 | 第76页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第76-77页 |
| 1.3 主要仪器 | 第77-78页 |
| 2 方法 | 第78-82页 |
| 2.1 炎症因子刺激结直肠癌细胞 | 第78页 |
| 2.2 Westernblot实验 | 第78-79页 |
| 2.3 IHC实验 | 第79页 |
| 2.4 构建mtSSB基因5’上游启动子区截短体荧光素酶报告质粒 | 第79-80页 |
| 2.5 染色质免疫共沉淀(ChIP)实验 | 第80-81页 |
| 2.5 转染细胞 | 第81页 |
| 2.6 细胞计数实验 | 第81-82页 |
| 2.7 EDU细胞增殖实验 | 第82页 |
| 2.8 平板克隆实验 | 第82页 |
| 3 结果 | 第82-89页 |
| 3.1 不同浓度的细胞因子对mtSSB表达的影响 | 第82-83页 |
| 3.2 FOXP1直接转录调控mtSSB的表达 | 第83-86页 |
| 3.3 IL-6通过mtSSB调控CRC细胞的生长 | 第86-88页 |
| 3.4 裸鼠皮下成瘤体内实验验证IL-6通过mtSSB调控结直肠癌细胞的生长· | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89-92页 |
| 小结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-105页 |
| 个人简历和研究成果 | 第105-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
