| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第15-28页 |
| 1.1 活性维生素D简介 | 第15-16页 |
| 1.1.1 维生素D的代谢 | 第15-16页 |
| 1.1.2 维生素D分子药理作用 | 第16页 |
| 1.2 维生素D的微生物转化 | 第16-18页 |
| 1.2.1 链霉菌类CYP105对维生素D的活性转化 | 第17-18页 |
| 1.2.2 假诺卡氏菌属类CYP107对维生素D的活性转化 | 第18页 |
| 1.3 维生素D羟基化酶的定向研究 | 第18-25页 |
| 1.3.1 维生素D羟基化酶的异源表达系统的构建 | 第19-20页 |
| 1.3.2 维生素D羟基化酶的基因工程 | 第20-22页 |
| 1.3.3 维生素D羟基化酶的蛋白质工程 | 第22-25页 |
| 1.4 提高维生素D微生物转化活性的方法 | 第25-26页 |
| 1.5 论文的设计思想与主要内容 | 第26-28页 |
| 1.5.1 论文的设计思想 | 第26-27页 |
| 1.5.2 论文的主要内容 | 第27-28页 |
| 第2章 维生素D类药物的微生物转化 | 第28-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第28页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4 培养基 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.2.1 CGMCC 5098对维生素D_3的转化研究 | 第29-30页 |
| 2.2.2 CGMCC 5098对维生素VD_2的转化研究 | 第30-31页 |
| 2.2.3 CGMCC 5098对10-酮-6-甲氧基-3,5-环维生素D_2转化研究 | 第31-32页 |
| 2.2.4 CGMCC 5098对1α,19-nor-VD_2转化研究 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-38页 |
| 2.3.1 CGMCC 5098对维生素D_3的转化研究 | 第33-34页 |
| 2.3.2 CGMCC 5098对维生素D_2的转化研究 | 第34-35页 |
| 2.3.3 CGMCC 5098对10-酮-6-甲氧基-3,5-环维生素D_2转化研究 | 第35-37页 |
| 2.3.4 CGMCC 5098对1α,19-nor-VD_2转化研究 | 第37-38页 |
| 2.4 本章小结和讨论 | 第38-40页 |
| 第3章 CGMCC 5098菌株的菌种鉴定 | 第40-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第41页 |
| 3.1.4 培养基以及主要试剂的配制 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 菌种的培养 | 第41页 |
| 3.2.2 形态学鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.3 分子学鉴定 | 第42-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-49页 |
| 3.3.1 形态学鉴定 | 第45页 |
| 3.3.2 基因组DNA提取 | 第45-46页 |
| 3.3.3 PCR扩增CGMCC 5098菌的16s rDNA | 第46页 |
| 3.3.4 16s rDNA区域序列测序以及其系统发育分析 | 第46-49页 |
| 3.4 本章小结和讨论 | 第49-51页 |
| 第4章 VDH基因高保守区域分析以及全长克隆 | 第51-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第51页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第51-52页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第52页 |
| 4.1.4 培养基以及主要试剂 | 第52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-62页 |
| 4.2.1 Vdh高保守序列同源性对比分析 | 第52页 |
| 4.2.2 扩增P. autotrophica CGMCC 5098 Vdh基因的高保守片段 | 第52-55页 |
| 4.2.3 CGMCC 5098高保守片段序列分析 | 第55页 |
| 4.2.4 采用LA PCR原理扩增vdh基因 | 第55-60页 |
| 4.2.5 根据科学家FUJII报道的vdh的基因序列设计引物克隆vdh的基因 | 第60-61页 |
| 4.2.6 根据韩国科学家kim报道的vdh基因序列设计引物克隆vdh的基因 | 第61-62页 |
| 4.2.7 根据CGMCC 5098羟基化酶已知序列(高保守片段)设计正反向测序引物进行测序 | 第62页 |
| 4.3 实验结果 | 第62-74页 |
| 4.3.1 Vdh高保守序列同源性对比分析 | 第62-68页 |
| 4.3.2 扩增P. autotrophica CGMCC 5098 Vdh基因的高保守片段 | 第68-69页 |
| 4.3.3 保守序列片段同源性比对分析结果 | 第69-70页 |
| 4.3.4 LA PCR原理扩增CGMCC 5098 vdh基因结果 | 第70-73页 |
| 4.3.5 根据科学家FUJII报道的vdh的基因序列设计引物克隆CGMCC 5098维生素D羟基化酶基因结果 | 第73页 |
| 4.3.6 根据韩国科学家Kim报道的vdh基因序列设计引物克隆CGMCC 5098 vdh的基因结果 | 第73-74页 |
| 4.3.7 根据CGMCC 5098羟基化酶高保守片段已知序列设计正反向测序引物进行测序结果 | 第74页 |
| 4.4 本章小结和讨论 | 第74-76页 |
| 第5章 构建一种改进的CTAB法快速提取革兰氏阳性假诺卡氏菌基因组DNA | 第76-87页 |
| 5.1 实验材料 | 第76-77页 |
| 5.1.1 实验菌株 | 第76页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第76页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第76-77页 |
| 5.1.4 主要培养基及主要试剂的配制 | 第77页 |
| 5.2 实验方法 | 第77-81页 |
| 5.2.1 G+菌的基因组DNA试剂盒提取法 | 第78-79页 |
| 5.2.2 氯化苄法提取CGMCC 5098菌的基因组 | 第79页 |
| 5.2.3 CTAB法提取CGMCC 5098菌的基因组 | 第79-80页 |
| 5.2.4 构建一种改进CTAB的方法提取CGMCC菌的基因组 | 第80-81页 |
| 5.3 实验结果 | 第81-85页 |
| 5.3.1 G+菌基因组DNA试剂盒提取法提取CGMCC 5098基因组DNA | 第81-82页 |
| 5.3.2 氯化苄法提取CGMCC 5098菌的基因组DNA结果 | 第82-83页 |
| 5.3.3 CTAB法提取CGMCC 5098菌的基因组 | 第83页 |
| 5.3.4 构建一种改进CTAB的方法提取CGMCC菌的基因组结果 | 第83-85页 |
| 5.4 本组小结和讨论 | 第85-87页 |
| 第6章 CGMCC 5098菌全基因组以及维生素D羟基化酶功能基因分析 | 第87-105页 |
| 6.1 实验材料 | 第87-88页 |
| 6.1.1 实验菌株 | 第87页 |
| 6.1.2 在线分析工具 | 第87-88页 |
| 6.2 实验方法 | 第88页 |
| 6.2.1 CGMCC 5098全基因组测序和分析 | 第88页 |
| 6.2.2 维生素D羟基化酶功能基因分析 | 第88页 |
| 6.3 实验结果 | 第88-103页 |
| 6.3.1 基因组组装结果 | 第88-89页 |
| 6.3.2 基因组空缺区域填充(gap close) | 第89页 |
| 6.3.3 编码基因GC含量以及长度分布 | 第89-91页 |
| 6.3.4 基因功能预测 | 第91-93页 |
| 6.3.5 羟基化酶基因筛选 | 第93-97页 |
| 6.3.6 维生素D羟基化酶基因分析 | 第97-103页 |
| 6.4 本章小结和讨论 | 第103-105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-115页 |
| 附录 | 第115-119页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第119页 |
