| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 高迁移率族蛋白B1和固有免疫 | 第11-13页 |
| 1.1.1 高迁移率族蛋白B1分子特征 | 第11-12页 |
| 1.1.2 高迁移率族蛋白B1和固有免疫 | 第12-13页 |
| 1.2 高迁移率族蛋白B1的定位 | 第13-15页 |
| 1.3 高迁移率族蛋白B1作为促炎因子的作用机制 | 第15-17页 |
| 1.3.1 促炎因子 | 第15页 |
| 1.3.2 高迁移率族蛋白B1作为促炎因子的作用机制 | 第15-17页 |
| 1.4 高迁移率族蛋白B1在自身免疫疾病中的发挥作用 | 第17-19页 |
| 1.5 结语及本文研究意义 | 第19-20页 |
| 2 日本七鳃鳗HMGB1蛋白的免疫相关研究 | 第20-26页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.1 主要试剂(表2.1) | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器(表2.2) | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 流式细胞术分析HMGB1在白细胞和神经轴体细胞中的表达 | 第20-21页 |
| 2.2.2 激光共聚焦显微镜确定Lj-HMGB1在神经轴体细胞中的细胞定位 | 第21页 |
| 2.2.3 免疫组织化学检测HMGB1在日本七鳃鳗中组织中的表达与分布 | 第21-22页 |
| 2.3 结果 | 第22-25页 |
| 2.3.1 流式细胞术分析Lj-HMGB1在白细胞和神经轴体细胞中的表达结果 | 第22-23页 |
| 2.3.2 激光共聚焦显微镜确定Lj-HMGB1在神经轴体细胞中的细胞定位结果 | 第23页 |
| 2.3.3 免疫组织化学检测HMGB1在日本七鳃鳗组织中的表达与分布结果 | 第23-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25页 |
| 2.5 小结 | 第25-26页 |
| 3 在不同抗原刺激下神经轴体中HMGB1的表达 | 第26-35页 |
| 3.1 材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 主要试剂(表3.1) | 第26页 |
| 3.1.2 主要仪器(表3.2) | 第26-27页 |
| 3.2 方法 | 第27-30页 |
| 3.2.1 神经轴体细胞的获取和不同刺激 | 第27页 |
| 3.2.2 BCA检测蛋白浓度 | 第27页 |
| 3.2.3 Western Blotting检测LPS刺激后HMGB1在神经轴体中的表达 | 第27-28页 |
| 3.2.4 引物(表3.3) | 第28页 |
| 3.2.5 免疫鱼的步骤 | 第28-29页 |
| 3.2.6 神经轴体及去除基因组总RNA的提取 | 第29页 |
| 3.2.7 神经轴体cDNA模板的制备与浓度测定 | 第29页 |
| 3.2.8 实时荧光定量PCR的检测 | 第29-30页 |
| 3.2.9 数据统计 | 第30页 |
| 3.3 结果 | 第30-34页 |
| 3.3.1 蛋白浓度的测定 | 第30-31页 |
| 3.3.2 体内检测正常组和LPS刺激日本七鳃鳗后神经轴体细胞HMGB1的表达 | 第31页 |
| 3.3.3 体外检测正常组和LPS刺激日本七鳃鳗神经轴体细胞后HMGB1的表达 | 第31-32页 |
| 3.3.4 体外检测正常组和LPS刺激东北七鳃鳗神经轴体细胞后HMGB1的表达 | 第32页 |
| 3.3.5 神经轴体总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.3.6 实时荧光定量PCR的检测 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34页 |
| 3.5 小结 | 第34-35页 |
| 4 检测日本七鳃鳗HMGB1蛋白与LIP蛋白的相互作用 | 第35-43页 |
| 4.1 材料 | 第35-36页 |
| 4.1.1 主要试剂(表4.1) | 第35页 |
| 4.1.2 主要仪器(表4.2) | 第35-36页 |
| 4.2 方法 | 第36-38页 |
| 4.2.1 rLj-HMGB1蛋白的诱导表达及纯化 | 第36-37页 |
| 4.2.2 超高分辨率显微镜确定HMGB1蛋白与LIP蛋白在神经轴体细胞中的定位 | 第37页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀检测HMGB1蛋白与LIP蛋白的相互作用 | 第37-38页 |
| 4.2.4 等温滴定量热法检测rLj-HMGB1蛋白与重组LIP蛋白的相互作用 | 第38页 |
| 4.3 结果 | 第38-42页 |
| 4.3.1 rLj-HMGB1蛋白的诱导表达及纯化 | 第38-39页 |
| 4.3.2 超高分辨率显微镜确定HMGB1蛋白与LIP蛋白在神经轴体细胞中的定位结果 | 第39-40页 |
| 4.3.3 免疫共沉淀检测HMGB1蛋白与LIP蛋白的相互作用 | 第40页 |
| 4.3.4 等温滴定量热法检测rLj-HMGB1蛋白与重组LIP蛋白的相互作用 | 第40-42页 |
| 4.4 讨论 | 第42页 |
| 4.5 小结 | 第42-43页 |
| 5 rLj-HMGB1蛋白对神经轴体中炎症因子的变化 | 第43-53页 |
| 5.1 材料 | 第43-44页 |
| 5.1.1 主要试剂(表5.1) | 第43页 |
| 5.1.2 主要仪器(表5.2) | 第43-44页 |
| 5.2 方法 | 第44-46页 |
| 5.2.1 rLj-HMGB1蛋白的诱导表达及纯化 | 第44页 |
| 5.2.2 免疫日本七鳃鳗的步骤 | 第44页 |
| 5.2.3 神经轴体的去除基因组总RNA提取 | 第44页 |
| 5.2.4 神经轴体cDNA模板的制备及浓度测定 | 第44页 |
| 5.2.5 炎症因子相关基因引物设计(表5.4) | 第44页 |
| 5.2.6 体外检测rLj-HMGB1蛋白刺激七鳃鳗神经轴体细胞 | 第44-45页 |
| 5.2.7 半定量PCR | 第45页 |
| 5.2.8 实时荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 5.2.9 数据统计 | 第46页 |
| 5.3 结果 | 第46-51页 |
| 5.3.1 RNA的提取 | 第46-47页 |
| 5.3.2 半定量PCR检测体内rLj-HMGB1蛋白刺激七鳃鳗后炎症因子的变化 | 第47-49页 |
| 5.3.3 实时荧光定量PCR检测体内rLj-HMGB1蛋白刺激七鳃鳗后炎症因子的变化 | 第49页 |
| 5.3.4 实时荧光定量PCR检测体外rLj-HMGB1蛋白刺激七鳃鳗神经轴体细胞后炎症因子的变化 | 第49-51页 |
| 5.4 讨论 | 第51-52页 |
| 5.5 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 本论文的创新点 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 A MIF、IL-8和IL-17开放阅读框的核苷酸序列 | 第60-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
