| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表(Abbreviations) | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第14-16页 |
| 1.2 木质素单体合成酶基因的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 植物细胞壁木质素合成相关转录因子调控网络研究进展 | 第18-21页 |
| 1.4 本课题研究内容 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与方法 | 第22-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 植株材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.4 感受态细胞 | 第23页 |
| 2.1.5 药品试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 MYB基因的生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.2.1 南林895杨MYB192、MYB199基因序列进化分析 | 第24页 |
| 2.2.2 基因结构分析 | 第24页 |
| 2.2.3 蛋白质结构和功能预测 | 第24-25页 |
| 2.3 RNA的提取及反转录 | 第25-27页 |
| 2.3.1 提取RNA样品材料的采集处理 | 第25页 |
| 2.3.2 器材的处理 | 第25页 |
| 2.3.3 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.4 RNA的反转录 | 第26-27页 |
| 2.4 超载体构建 | 第27-34页 |
| 2.4.1 目的基因扩增 | 第27-28页 |
| 2.4.2 PCR产物的回收 | 第28-29页 |
| 2.4.3 PCR加A反应 | 第29页 |
| 2.4.4 T载的连接及转化感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.4.5 菌落PCR检测 | 第30-31页 |
| 2.4.6 质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.4.7 质粒酶切、回收、连接超表达载体 | 第32-34页 |
| 2.5 RNAiMYB192和RNAiMYB199载体构建 | 第34-39页 |
| 2.5.1 RNAiMYB192和RNAiMYB199正向和反向片段的扩增 | 第34页 |
| 2.5.2 PCR产物的回收 | 第34-35页 |
| 2.5.3 加A反应 | 第35页 |
| 2.5.4 RNAiMYBs正反向片段与T载体的连接,转化 | 第35页 |
| 2.5.5 菌落PCR | 第35页 |
| 2.5.6 RNAiMYBs正反向片段与中间载体psk-int的连接 | 第35-38页 |
| 2.5.7 中间载体psk-RNAiMYBs与PCAMBIA1302载体的连接 | 第38-39页 |
| 2.6 杨的遗传转化 | 第39-41页 |
| 2.6.1 南林895杨叶片Hyg本底浓度的测定 | 第39页 |
| 2.6.2 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 2.6.3 电击转化感受态细胞 | 第40页 |
| 2.6.4 菌落检测及菌种保存 | 第40页 |
| 2.6.5 南林895杨叶片预培养 | 第40页 |
| 2.6.6 南林895杨预培叶片的侵染 | 第40-41页 |
| 2.6.7 南林895杨叶片共培养 | 第41页 |
| 2.6.8 南林895杨叶片延迟选择培养 | 第41页 |
| 2.6.9 南林895杨叶片选择培养 | 第41页 |
| 2.6.10 南林895杨转化芽的伸长培养 | 第41页 |
| 2.6.11 南林895杨转化苗的生根培养 | 第41页 |
| 2.7 阳性苗的检测及炼苗移栽 | 第41-43页 |
| 2.7.1 转化苗炼苗移栽 | 第41页 |
| 2.7.2 南林895杨DNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.7.3 超表达苗鉴定 | 第42页 |
| 2.7.4 干涉苗鉴定 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-70页 |
| 3.1 目的基因的生物信息学分析 | 第43-53页 |
| 3.1.1 PtrMYB192、PtrMYB199的氨基酸序列进化分析 | 第43-44页 |
| 3.1.2 PtrMYB192、PtrMYB199基因结构分析 | 第44-45页 |
| 3.1.3 PtrMYB192、PtrMYB199一级结构分析 | 第45-46页 |
| 3.1.4 PtrMYB192、PtrMYB199信号肽分析 | 第46-47页 |
| 3.1.5 跨膜结构预测 | 第47-48页 |
| 3.1.6 蛋白结构域的分析及功能预测 | 第48-49页 |
| 3.1.7 蛋白结卷曲螺旋预测分析 | 第49-50页 |
| 3.1.8 蛋白质二级和三级结构的预测分析 | 第50-53页 |
| 3.2 超表达载体的构建 | 第53-59页 |
| 3.2.1 RNA提取和cDNA反转录结果分析 | 第54-55页 |
| 3.2.2 目的基因的扩增与阳性菌落的PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2.3 目的片段与PCAMBIA1302载体的连接结果分析 | 第56-59页 |
| 3.3 干涉载体的构建 | 第59-64页 |
| 3.3.1 RNAiMYBs的克隆与阳性菌落的PCR鉴定结果分析 | 第59-61页 |
| 3.3.2 RNAiMYBs与中间载体的链接和阳性菌落鉴定分析 | 第61-63页 |
| 3.3.3 RNAiMYBs发卡结构与载体PCAMBIA1302连接分析 | 第63-64页 |
| 3.4 南林895杨的遗传转化 | 第64-70页 |
| 3.4.1 MYBs超表达载体和RNAiMYBs转化农杆菌结果分析 | 第64-65页 |
| 3.4.2 南林895杨叶片抗生素适应浓度研究结果分析 | 第65页 |
| 3.4.3 叶盘法转化南林895杨 | 第65-66页 |
| 3.4.4 南林895杨共培养 | 第66-67页 |
| 3.4.5 南林筛选培养 | 第67页 |
| 3.4.6 南林895杨芽伸长培养 | 第67-68页 |
| 3.4.7 南林895杨生根培养 | 第68-69页 |
| 3.4.8 南林895杨抗性苗炼苗检测及阳性植株的移栽 | 第69-70页 |
| 3.4.9 PCR法检测转化苗 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| 4.1 生物信息学分析预测了目的基因的结构 | 第70-71页 |
| 4.2 RNAi载体沉默效率 | 第71-72页 |
| 4.3 转基因植株的检测 | 第72-73页 |
| 4.4 下一步工作计划 | 第73页 |
| 5 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士期间发表和完成的论文题目 | 第86页 |
