| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 植物转录因子概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 植物转录因子的类型 | 第12页 |
| 1.1.2 植物转录因子的功能和结构 | 第12-13页 |
| 1.1.3 植物转录因子在响应逆境胁迫中的作用 | 第13页 |
| 1.2 WRKY家族转录因子的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 WRKY家族转录因子的结构特点和分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 WRKY家族转录因子的生物学功能 | 第14页 |
| 1.2.3 橡胶树WRKY家族转录因子的研究 | 第14-15页 |
| 1.3 植物抗逆机制研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 离子平衡与渗透调节 | 第15页 |
| 1.3.2 抗氧化防御系统 | 第15页 |
| 1.3.3 抗逆相关蛋白 | 第15-16页 |
| 1.3.4 转录因子对基因表达的调控与信号转导 | 第16-17页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.5 研究的技术路线 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.1 橡胶树各时期叶片和各组织的采集 | 第20页 |
| 2.1.2 橡胶树各个处理下胶乳的采取 | 第20页 |
| 2.2 质粒及菌种 | 第20页 |
| 2.2.1 质粒 | 第20页 |
| 2.2.2 菌种 | 第20页 |
| 2.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.4 培养基 | 第21-23页 |
| 2.5 核酸提取 | 第23-25页 |
| 2.5.1 试剂 | 第23-24页 |
| 2.5.2 RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.6 半定量分析 | 第25-26页 |
| 2.6.1 cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.6.2 引物设计 | 第25-26页 |
| 2.7 目的基因的克隆 | 第26-27页 |
| 2.8 表达载体构建 | 第27-29页 |
| 2.8.1 目的基因的回收 | 第27-28页 |
| 2.8.2 重组质粒的构建 | 第28页 |
| 2.8.3 重组质粒的转化 | 第28-29页 |
| 2.8.4 重组质粒提取 | 第29页 |
| 2.9 生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.10 WRKY基因的表达模式分析 | 第30-31页 |
| 2.10.1 荧光定量引物设计 | 第30页 |
| 2.10.2 荧光定量标准曲线的制作 | 第30-31页 |
| 2.10.3 荧光定量检测各个基因在不同材料中的表达丰度 | 第31页 |
| 2.11 WRKY转录因子的亚细胞定位分析 | 第31-33页 |
| 2.11.1 融合表达载体构建 | 第31页 |
| 2.11.2 农杆菌介导转化烟草 | 第31-33页 |
| 2.12 转录因子转录激活功能验证 | 第33-34页 |
| 2.12.1 酵母感受态的制备 | 第33页 |
| 2.12.2 酵母转化 | 第33-34页 |
| 2.13 HbWRKY57基因转化拟南芥 | 第34-38页 |
| 2.13.1 野生型拟南芥的种植 | 第34页 |
| 2.13.2 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第34页 |
| 2.13.3 T2代转基因拟南芥纯系植株的获得 | 第34-35页 |
| 2.13.4 T3代转基因拟南芥纯系植株的获得 | 第35页 |
| 2.13.5 阳性转基因拟南芥植株的PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 2.13.6 转基因拟南芥种子萌发率测定 | 第36页 |
| 2.13.7 转基因拟南芥根系的长度测定 | 第36页 |
| 2.13.8 拟南芥材料的培养及处理 | 第36页 |
| 2.13.9 拟南芥中相应抗逆基因表达的变化 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-66页 |
| 3.1 橡胶树胶乳RNA提取与质量检测 | 第38页 |
| 3.1.1 胶乳RNA提取与质量检测 | 第38页 |
| 3.1.2 胶乳总RNA的半定量RT-PCR检测 | 第38页 |
| 3.2 HbWRKY27和HbWRKY57基因的克隆和生物信息学分析 | 第38-44页 |
| 3.2.1 HbWRKY27和HbWRKY57基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3.2.2 生物信息学分析 | 第39-44页 |
| 3.3 HbWRKY27与HbWRKY 57的基因表达模式 | 第44-48页 |
| 3.3.1 HbWRKY27与57基因在橡胶树不同组织中的表达 | 第44页 |
| 3.3.2 HbWRKY27与57基因在橡胶树不同发育时期叶片的表达分析 | 第44-45页 |
| 3.3.3 割胶对HbWRKY27与57基因表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.4 激素刺激对HbWRKY27基因表达的影响 | 第46页 |
| 3.3.5 激素刺激对HbWRKY57基因表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.6 不同级别死皮橡胶树中HbWRKY27与57基因表达分析 | 第47-48页 |
| 3.4 HbWRKY27与HbWRKY57的亚细胞定位 | 第48-50页 |
| 3.4.1 表达载体构建与酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.4.2 表达载体的菌液PCR鉴定 | 第49页 |
| 3.4.3 亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 3.5 HbWRKY27和HbWRKY57转录激活功能验证 | 第50-52页 |
| 3.5.1 载体构建及菌落PCR检测 | 第50页 |
| 3.5.2 表达载体的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| 3.5.3 转录激活功能验证 | 第51-52页 |
| 3.6 HbWRKY57基因转化拟南芥 | 第52-66页 |
| 3.6.1 HbWRKY57转基因拟南芥株系的筛选 | 第52页 |
| 3.6.2 HbWRKY57转基因拟南芥株系的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.6.3 HbWRKY57转基因拟南芥株系的表型 | 第53-54页 |
| 3.6.4 转基因拟南芥中HbWRKY57基因的表达水平检测 | 第54-55页 |
| 3.6.5 转基因拟南芥的耐盐性分析 | 第55-57页 |
| 3.6.6 转基因拟南芥的干旱胁迫分析 | 第57-59页 |
| 3.6.7 转基因拟南芥对ABA响应的变化 | 第59-61页 |
| 3.6.8 转基因拟南芥中抗逆相关基因的表达 | 第61-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| 4.1 WRKY转录因子在橡胶树响应逆境胁迫中的作用 | 第66-67页 |
| 4.2 WRKY转录因子在调控橡胶树叶片发育及衰老中的作用 | 第67-68页 |
| 4.3 WRKY转录因子在橡胶树产胶生理中的作用 | 第68页 |
| 4.4 WRKY转录因子与橡胶树死皮发生之间的关系 | 第68-70页 |
| 论文创新点 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第81页 |
