| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 导论 | 第10-18页 |
| 1.1 香蕉简介 | 第10页 |
| 1.2 香蕉枯萎病与尖孢镰刀菌 | 第10-13页 |
| 1.2.1 香蕉枯萎病 | 第10-11页 |
| 1.2.2 尖孢镰刀菌 | 第11页 |
| 1.2.3 尖孢镰刀菌致病机理 | 第11页 |
| 1.2.4 香蕉枯萎病发病主要症状 | 第11-12页 |
| 1.2.5 香蕉枯萎病菌的生理小种与危害 | 第12页 |
| 1.2.6 香蕉抗病机理及目前的香蕉枯萎病病害的治理 | 第12-13页 |
| 1.3 香蕉枯萎病菌的致病分子机制 | 第13-14页 |
| 1.4 利用比较蛋白质组学寻找致病基因 | 第14页 |
| 1.5 尖孢镰刀菌的遗传转化 | 第14-16页 |
| 1.5.1 丝状真菌的几种主要转化方法 | 第14-15页 |
| 1.5.2 转化DNA与基因组的整合 | 第15-16页 |
| 1.6 本实验的研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 1.7 技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-32页 |
| 2.1 材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.2 试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.3 试剂及配液 | 第19-20页 |
| 2.1.4 培养基 | 第20页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 前期蛋白质组实验数据整理 | 第21页 |
| 2.2.2 Foc1和Foc4的培养 | 第21页 |
| 2.2.3 香蕉的处理及采样 | 第21-22页 |
| 2.2.4 香蕉枯萎病菌RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.5 反转录cDNA | 第23页 |
| 2.2.6 基因全长克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.7 基因表达分析——荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.2.8 香蕉枯萎病菌4号生理小种基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.9 基因敲除载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.10 原生质体的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.11 PEG介导的原生质体转化 | 第29页 |
| 2.2.12 转化子基因敲除验证 | 第29-30页 |
| 2.2.13 敲除子的菌落形态观察 | 第30页 |
| 2.2.14 敲除子的玻璃纸穿透实验 | 第30页 |
| 2.2.15 敲除子的离体叶片实验 | 第30页 |
| 2.2.16 敲除子的苹果切片定殖实验 | 第30-31页 |
| 2.2.17 敲除子的过氧化氢耐受性实验 | 第31页 |
| 2.2.18 敲除子纤维素利用实验 | 第31页 |
| 2.2.19 敲除子渗透压胁迫实验 | 第31页 |
| 2.2.20 敲除子细胞壁选择性压力实验 | 第31页 |
| 2.2.21 敲除子致病性实验 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-50页 |
| 3.1 目的基因克隆 | 第32-33页 |
| 3.2 基因表达分析 | 第33-35页 |
| 3.3 目的基因敲除载体的构建 | 第35-38页 |
| 3.3.1 同源臂的扩增 | 第35-37页 |
| 3.3.2 载体构建 | 第37页 |
| 3.3.3 基因敲除载体的酶切验证 | 第37-38页 |
| 3.4 原生质体的获得 | 第38-39页 |
| 3.5 敲除转化子的验证 | 第39-41页 |
| 3.5.1 潮霉素抗性筛选 | 第39页 |
| 3.5.2 转化子的共聚焦显微镜观察 | 第39-40页 |
| 3.5.3 转化子PCR验证 | 第40-41页 |
| 3.6 敲除子的表型及生物特性分析 | 第41-47页 |
| 3.6.1 菌落形态 | 第41-42页 |
| 3.6.2 玻璃纸穿透 | 第42-43页 |
| 3.6.3 苹果切片穿透试验 | 第43页 |
| 3.6.4 香蕉离体叶片试验 | 第43-44页 |
| 3.6.5 过氧化氢耐受试验 | 第44-45页 |
| 3.6.6 纤维素利用 | 第45页 |
| 3.6.7 渗透压胁迫试验 | 第45-46页 |
| 3.6.8 细胞壁选择性胁迫试验 | 第46-47页 |
| 3.7 致病力测定 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 基因表达分析 | 第50-51页 |
| 4.2 敲除载体的构建 | 第51-52页 |
| 4.3 原生质体的转化 | 第52页 |
| 4.4 转化子的检测与基因敲除 | 第52页 |
| 4.5 表型及致病性检测 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |