| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪言 | 第17-27页 |
| 1.1 自噬 | 第17-19页 |
| 1.1.1 自噬简介 | 第17-18页 |
| 1.1.2 自噬的检测方法 | 第18-19页 |
| 1.2 microRNA | 第19-22页 |
| 1.2.1 microRNA简介 | 第19-21页 |
| 1.2.2 microRNA与肿瘤细胞自噬的关系 | 第21页 |
| 1.2.3 生物信息学预测靶基因 | 第21-22页 |
| 1.2.4 miR-10b与食管癌 | 第22页 |
| 1.3 DAZAP1与基因剪切 | 第22-23页 |
| 1.4 mTOR与细胞自噬 | 第23-25页 |
| 1.5 TSC2的S981位点磷酸化与mTOR关系 | 第25-26页 |
| 1.6 立项背景与研究意义 | 第26页 |
| 1.7 研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 miR-10b对食管癌细胞自噬的研究 | 第27-53页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-31页 |
| 2.1.1 实验溶液配置 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验试剂与耗材 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第29-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-43页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第31-34页 |
| 2.2.1.1 细胞复苏 | 第31页 |
| 2.2.1.2 细胞传代 | 第31页 |
| 2.2.1.3 细胞冻存 | 第31-32页 |
| 2.2.1.4 细胞转染 | 第32-34页 |
| 2.2.2 Western Blot | 第34-37页 |
| 2.2.2.1 总蛋白的收集 | 第34页 |
| 2.2.2.2 BCA蛋白定量 | 第34-35页 |
| 2.2.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-37页 |
| 2.2.3 实时定量PCR | 第37-42页 |
| 2.2.3.1 RNA样品的收集 | 第37页 |
| 2.2.3.2 RNA的提取 | 第37页 |
| 2.2.3.3 加尾沉淀 | 第37-39页 |
| 2.2.3.4 逆转录 | 第39页 |
| 2.2.3.5 lncRNA逆转录 | 第39-40页 |
| 2.2.3.6 microRNA逆转录 | 第40-41页 |
| 2.2.3.7 实时定量PCR | 第41-42页 |
| 2.2.4 激光共聚焦 | 第42-43页 |
| 2.2.5 构建pcDNA3.1-DAZAP1与pcDNA3.1-TSC2 | 第43页 |
| 2.2.6 设计并合成DAZAP1 -siRNA | 第43页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第43-52页 |
| 2.3.1 筛选自噬敏感的肿瘤细胞系 | 第43页 |
| 2.3.2 筛选目标microRNA | 第43-44页 |
| 2.3.3 多方面验证筛选的microRNA对自噬的影响 | 第44-47页 |
| 2.3.3.1 蛋白质水平验证——Western Blot实验 | 第44-45页 |
| 2.3.3.2 细胞水平验证——激光共聚焦显微镜 | 第45-47页 |
| 2.3.4 预测microRNA的靶基因 | 第47页 |
| 2.3.4.1 生物信息学预测结果 | 第47页 |
| 2.3.5 对miR-10b预测靶基因实验验证 | 第47-49页 |
| 2.3.5.1 分子层面验证 | 第47-48页 |
| 2.3.5.2 蛋白层面验证 | 第48-49页 |
| 2.3.6 si-DAZAP1对自噬的作用 | 第49-52页 |
| 2.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 miR-10b的靶基因DAZAP1在食管癌细胞生物学研究 | 第53-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第53-55页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第53页 |
| 3.1.2 实验耗材 | 第53-54页 |
| 3.1.3 相关溶液配制 | 第54-55页 |
| 3.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 3.2.1 细胞功能实验 | 第55-56页 |
| 3.3 实验结果 | 第56-68页 |
| 3.3.1 细胞增殖能力检测 | 第56-58页 |
| 3.3.2 细胞侵袭能力检测——TRANSWELL实验 | 第58-60页 |
| 3.3.3 细胞划痕愈合实验 | 第60-61页 |
| 3.3.4 RNA-seq找寻下游靶点 | 第61-64页 |
| 3.3.5 WB验证TSC2 S981位点磷酸化位点缺失对mTOR影响 | 第64-68页 |
| 3.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第四章 结论、创新点及展望 | 第69-73页 |
| 4.1 结论 | 第69-70页 |
| 4.2 创新点 | 第70页 |
| 4.3 展望 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 研究成果与学术论文 | 第83-85页 |
| 作者和导师简介 | 第85-87页 |
| 附件 | 第87-88页 |
