| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 研究背景及文献综述 | 第16-28页 |
| 1.1 免疫系统 | 第17-23页 |
| 1.1.1 免疫系统的组成 | 第17-19页 |
| 1.1.2 免疫应答的分类 | 第19-22页 |
| 1.1.3 免疫系统的功能 | 第22-23页 |
| 1.2 蛋白酶体系统 | 第23-28页 |
| 1.2.1 蛋白酶体的分类 | 第23-24页 |
| 1.2.2 蛋白酶体的功能 | 第24-28页 |
| 第二章 REGγ是NF-κB信号通路的靶基因 | 第28-53页 |
| 2.1 实验材料、试剂 | 第29-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第29-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-43页 |
| 2.2.1 中性粒细胞的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.2 L929条件性培养基的收集 | 第34-35页 |
| 2.2.3 骨髓细胞来源的巨噬细胞的分化 | 第35页 |
| 2.2.4 RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.5 半定量RT-RCR | 第36-37页 |
| 2.2.6 实时定量RT-PCR | 第37-38页 |
| 2.2.7 免疫印迹(WB) | 第38-39页 |
| 2.2.8 建立LPS诱导的腹膜炎模型 | 第39页 |
| 2.2.9 巨噬细胞的细菌感染实验 | 第39页 |
| 2.2.10 核质分离 | 第39-40页 |
| 2.2.11 免疫荧光(IF) | 第40-41页 |
| 2.2.12 染色质免疫共沉淀(CHIP) | 第41-43页 |
| 2.3 实验结果 | 第43-52页 |
| 2.3.1 LPS可以上调REGy的表达 | 第43-49页 |
| 2.3.2 REGγ的表达的上调是NF-κB信号通路依赖的 | 第49-52页 |
| 2.4 本章小结和讨论 | 第52-53页 |
| 第三章 REGγ缺失型小鼠抵抗细菌感染的能力缺陷 | 第53-65页 |
| 3.1 实验材料、试剂 | 第54页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第54页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.2.1 Listeria Monocytogenes细菌诱导的腹膜炎模型的建立 | 第54-55页 |
| 3.2.2 CLP(Cecal Ligation Puncture)手术 | 第55页 |
| 3.2.3 克隆生成(CFU)实验 | 第55-56页 |
| 3.2.4 骨髓移植实验(BMT) | 第56-57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-63页 |
| 3.3.1 REGγ缺失型小鼠抗Listeria Monocytogenes细菌感染的能力下降 | 第57-58页 |
| 3.3.2 非造血细胞同时参与了REGγ缺失型小鼠抗感染能力的缺陷 | 第58-60页 |
| 3.3.3 REGγ缺失型小鼠低抗CLP感染的能力下降 | 第60-63页 |
| 3.4 本章讨论和小结 | 第63-65页 |
| 第四章 感染后REGy缺失型小鼠中吞噬细胞的浸润能力较差 | 第65-79页 |
| 4.1 实验材料、试剂 | 第65-66页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第65-66页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 4.2.1 FACS分析 | 第66页 |
| 4.2.2 石蜡切片 | 第66-67页 |
| 4.2.3 H-E染色 | 第67-69页 |
| 4.2.4 Dunn Chamber方法检测中性粒细胞的趋化性 | 第69页 |
| 4.2.5 Trans-Well方法检测中性粒细胞的趋化性 | 第69-70页 |
| 4.3 实验结果 | 第70-77页 |
| 4.3.1 REGγ缺失型小鼠在感染后组织中炎症细胞的浸润较少 | 第70-72页 |
| 4.3.2 REGγ缺失型小鼠感染后腹腔和外周血中的中性粒细胞和单核细胞较少 | 第72-77页 |
| 4.4 本章讨论和小结 | 第77-79页 |
| 第五章 REGγ缺失的巨噬细胞和中性粒细胞杀菌能力较弱 | 第79-96页 |
| 5.1 实验材料、试剂 | 第80-81页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第80页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第80-81页 |
| 5.2 实验方法 | 第81-84页 |
| 5.2.1 GFP标记细菌的培养 | 第81页 |
| 5.2.2 免疫荧光(IF) | 第81页 |
| 5.2.3 吞噬实验 | 第81-82页 |
| 5.2.4 杀菌实验- Antibiotic Protection Assays (APA) | 第82页 |
| 5.2.5 NO检测 | 第82-83页 |
| 5.2.6 RAW264.7细胞的转染 | 第83页 |
| 5.2.7 中性粒细胞的提取 | 第83页 |
| 5.2.8 L929条件性培养基的收集 | 第83页 |
| 5.2.9 骨髓细胞来源的巨噬细胞的分化 | 第83-84页 |
| 5.2.10 RNA的提取 | 第84页 |
| 5.2.11 实时定量RT-PCR | 第84页 |
| 5.2.12 免疫印迹(WB) | 第84页 |
| 5.3 实验结果 | 第84-94页 |
| 5.3.1 REGγ缺失的巨噬细胞其吞噬细菌的能力没变 | 第84-86页 |
| 5.3.2 缺失REGγ后,中性粒细胞和巨噬细胞清除细菌的能力较差 | 第86-93页 |
| 5.3.3 缺失REGγ的巨噬细胞,LPS刺激后PGK和GLUT-1的表达较少 | 第93-94页 |
| 5.3.4 缺失REGγ,对于LPS诱导的自噬活性没有影响 | 第94页 |
| 5.4 本章小结和讨论 | 第94-96页 |
| 第六章 REGγ影响了P300和PCAF与靶基因启动子的结合 | 第96-110页 |
| 6.1 实验材料、试剂 | 第96-97页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第96-97页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第97页 |
| 6.2 实验方法 | 第97-99页 |
| 6.2.1 核质分离 | 第97-98页 |
| 6.2.2 染色质免疫共沉淀(CHIP) | 第98页 |
| 6.2.3 实时定量RT-PCR | 第98页 |
| 6.2.4 ELISA | 第98-99页 |
| 6.3 实验结果 | 第99-108页 |
| 6.3.1 REGγ对于LPS刺激的JNK、ERK、P38的活性没有影响 | 第99-100页 |
| 6.3.2 REGγ对于LPS刺激的IκBα的降解没有影响 | 第100-101页 |
| 6.3.3 REGγ对于LPS刺激的P100的剪切没有影响 | 第101-103页 |
| 6.3.4 缺失REGγ,影响了P300、PCAF与靶基因启动子的结合 | 第103-104页 |
| 6.3.5 REGγ缺失后抑制了NF-κB信号通路依赖的促炎因子和趋化因子的表达 | 第104-108页 |
| 6.4 本章小结和讨论 | 第108-110页 |
| 第七章 REGγ可以降解KLF2 | 第110-128页 |
| 7.1 实验材料、试剂 | 第110-112页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第110-111页 |
| 7.1.2 实验试剂 | 第111-112页 |
| 7.2 实验方法 | 第112-113页 |
| 7.2.1 免疫共沉淀(Co-IP) | 第112页 |
| 7.2.2 Pull-down | 第112-113页 |
| 7.2.3 报告基因(Report gene) | 第113页 |
| 7.3 实验结果 | 第113-126页 |
| 7.3.1 REGγ对KLF2蛋白水平的调控是蛋白酶体依赖的 | 第113-114页 |
| 7.3.2 REGγ可以降解KLF2 | 第114-117页 |
| 7.3.3 中性粒细胞和巨噬细胞中REGγ可以降解KLF2 | 第117-118页 |
| 7.3.4 REG家族只有REGγ可以降解KLF2 | 第118-119页 |
| 7.3.5 REGγ对KLF2的降解是REGγ活性依赖的 | 第119页 |
| 7.3.6 REGγ与KLF2共定位于细胞核中 | 第119-120页 |
| 7.3.7 REGγ与KLF2可以在体内、体外相互作用 | 第120-123页 |
| 7.3.8 REGγ抑制KLF2对NF-κB信号通路活性的影响 | 第123-124页 |
| 7.3.9 REGγ缺失型巨噬细胞杀菌能力的减弱是KLF2依赖的 | 第124-126页 |
| 7.4 本章小结与讨论 | 第126-128页 |
| 第八章 论文总结和讨论 | 第128-135页 |
| 8.1 论文总结 | 第128-132页 |
| 8.2 讨论 | 第132-135页 |
| 附录(缩略词) | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
