人类瓣状核酸内切酶FEN1底物识别及甲基化调控的机制研究
| 项目资助 | 第5页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第5-6页 |
| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 主要缩略词 | 第12-16页 |
| 1 文献综述 | 第16-31页 |
| 1.1 FEN1的功能研究 | 第16-18页 |
| 1.1.1 FEN1在DNA复制中的作用 | 第16-17页 |
| 1.1.2 FEN1在DNA损伤修复中的作用 | 第17页 |
| 1.1.3 FEN1与肿瘤的发生发展 | 第17-18页 |
| 1.2 FEN1的生化活性研究 | 第18-23页 |
| 1.2.1 FEN1的核酸酶活性研究 | 第18-21页 |
| 1.2.2 FEN1的互作蛋白研究 | 第21-23页 |
| 1.3 FEN1的结构生物学研究 | 第23-25页 |
| 1.3.1 人类FEN1的结构特征 | 第23-24页 |
| 1.3.2 FEN1的底物识别机制研究 | 第24-25页 |
| 1.4 蛋白质的翻译后修饰 | 第25-30页 |
| 1.4.1 翻译后修饰的类型 | 第25-27页 |
| 1.4.2 FEN1的翻译后修饰研究 | 第27-30页 |
| 1.5 FEN1的应用 | 第30页 |
| 1.6 本章小结 | 第30-31页 |
| 2 实验材料与方法 | 第31-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-39页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第31页 |
| 2.1.2 化学试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 菌株、酶、标准品以及试剂盒 | 第31-33页 |
| 2.1.4 常用纯化色谱柱 | 第33页 |
| 2.1.5 常用晶体筛选试剂盒 | 第33页 |
| 2.1.6 fen1的克隆与DNA的合成 | 第33-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-54页 |
| 2.2.1 双分枝DNA的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.2 分子生物实验 | 第40-48页 |
| 2.2.3 酶动力学实验 | 第48-51页 |
| 2.2.4 蛋白质-DNA的共结晶 | 第51-53页 |
| 2.2.5 Western-blot检测目的蛋白 | 第53-54页 |
| 3 DNA的制备、FEN1的纯化及生化活性分析 | 第54-84页 |
| 3.1 结晶用DNA的制备及纯化 | 第54页 |
| 3.2 FEN1蛋白的纯化 | 第54-82页 |
| 3.2.1 FEN1蛋白的表达 | 第54-61页 |
| 3.2.2 FEN1蛋白的可溶性 | 第61-76页 |
| 3.2.3 FEN1蛋白的纯化 | 第76-82页 |
| 3.3 FEN1蛋白的生化活性 | 第82-83页 |
| 3.4 本章讨论 | 第83-84页 |
| 4 晶体制备及结构解析 | 第84-89页 |
| 4.1 共结晶底物双分枝DNA的优化 | 第84-86页 |
| 4.2 晶体的生长 | 第86-87页 |
| 4.3 本章讨论 | 第87-89页 |
| 5 FEN1-DNA复合体的结构 | 第89-102页 |
| 5.1 FEN1蛋白的总体结构 | 第89-92页 |
| 5.2 5’分枝DNA的构象 | 第92-96页 |
| 5.3 活性中心和催化机制 | 第96-98页 |
| 5.4 甲基化修饰的调控机制 | 第98-100页 |
| 5.5 本章讨论 | 第100-102页 |
| 6 总结与展望 | 第102-105页 |
| 6.1 总结 | 第102-104页 |
| 6.2 展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-113页 |
| 附录 | 第113-114页 |
| 博士期间发表的论文 | 第114页 |
