| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-55页 |
| 1.1 遗传发育生物学理论基础概述 | 第15-16页 |
| 1.2 脊椎动物消化系统的基本组成部分 | 第16-22页 |
| 1.2.1 肝脏的形态结构和基本功能单位 | 第17-21页 |
| 1.2.2 胆管系统的基本结构 | 第21-22页 |
| 1.3 肝脏及胆管的形态发生 | 第22-30页 |
| 1.3.1 肝脏形态发生 | 第22-26页 |
| 1.3.2 胆管系统形态发生 | 第26-30页 |
| 1.4 肝脏的稳态维持及组织再生 | 第30-37页 |
| 1.4.1 肝脏的稳态维持 | 第30-32页 |
| 1.4.2 肝脏的组织再生 | 第32-37页 |
| 1.5 同源异形盒(homeobox)基因家族 | 第37-46页 |
| 1.5.1 同源异形盒基因hhex | 第39-43页 |
| 1.5.2 同源异形盒基因pdx1 | 第43-44页 |
| 1.5.3 同源异形盒基因cdx | 第44-46页 |
| 1.6 Cre/LoxP细胞谱系示踪技术 | 第46-49页 |
| 1.7 CRISPER/Cas9介导的反向遗传学技术 | 第49-53页 |
| 1.8 本研究的内容、目的和意义 | 第53-55页 |
| 第2章 材料与方法 | 第55-79页 |
| 2.1 斑马鱼实验 | 第55-58页 |
| 2.1.1 斑马鱼品系及饲养 | 第55-56页 |
| 2.1.2 斑马鱼伦理 | 第56页 |
| 2.1.3 斑马鱼受精卵及胚胎的获得 | 第56页 |
| 2.1.4 斑马鱼胚胎显微注射 | 第56-57页 |
| 2.1.5 斑马鱼肝脏腹部肝叶部分切除手术 | 第57-58页 |
| 2.1.6 斑马鱼成鱼腹腔注射 | 第58页 |
| 2.1.7 斑马鱼基因型的鉴定 | 第58页 |
| 2.2 人类细胞系实验 | 第58-59页 |
| 2.2.1 细胞培养与传代 | 第58-59页 |
| 2.2.2 细胞转染 | 第59页 |
| 2.3 实验试剂及试剂盒简介 | 第59-60页 |
| 2.4 DNA相关实验方法 | 第60-65页 |
| 2.4.1 基因克隆实验 | 第60-63页 |
| 2.4.2 质粒DNA的测序确认 | 第63页 |
| 2.4.3 基因组DNA的提取 | 第63-64页 |
| 2.4.4 转基因斑马鱼的构建 | 第64-65页 |
| 2.5 RNA相关实验方法 | 第65-69页 |
| 2.5.1 总RNA提取 | 第65页 |
| 2.5.2 DNase I处理以及纯化 | 第65-66页 |
| 2.5.3 逆转录及cDNA的获得 | 第66页 |
| 2.5.4 mRNA的体外合成 | 第66页 |
| 2.5.5 斑马鱼胚胎整胚原位杂交(WISH) | 第66-69页 |
| 2.6 蛋白质相关实验方法 | 第69-74页 |
| 2.6.1 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第69-71页 |
| 2.6.2 冰冻切片免疫荧光染色 | 第71-73页 |
| 2.6.3 整胚免疫荧光染色 | 第73-74页 |
| 2.7 双荧光素酶报告基因技术(Dual Luciferase Assay) | 第74-75页 |
| 2.8 利用CRISPR/Cas9系统构建突变体斑马鱼 | 第75-79页 |
| 第3章 斑马鱼Fabp10a和Bhmt蛋白的抗体制备 | 第79-85页 |
| 3.1 斑马鱼Fabp10a蛋白抗体的制备及检测 | 第80-82页 |
| 3.1.1 斑马鱼Fabp10a蛋白抗体的制备 | 第80页 |
| 3.1.2 斑马鱼Fabp10a蛋白抗体的检测 | 第80-82页 |
| 3.2 斑马鱼Bhmt蛋白抗体的制备及检测 | 第82-85页 |
| 3.2.1 斑马鱼Bhmt蛋白抗体的制备 | 第82页 |
| 3.2.2 斑马鱼Bhmt蛋白抗体的检测 | 第82-85页 |
| 第4章 斑马鱼hhex突变体及Tg(bhmt::EGFP)品系的建立 | 第85-89页 |
| 4.1 斑马鱼hhex突变体品系的建立 | 第85-87页 |
| 4.2 转基因斑马鱼Tg(bhmt::EGFP)品系的建立 | 第87-89页 |
| 第5章 斑马鱼hhex基因缺失突变体的表型研究 | 第89-96页 |
| 5.1 斑马鱼hhex突变体纯合子胚胎出现肝内导管 | 第89-91页 |
| 5.2 斑马鱼hhex突变体纯合子肝脏形态三维重构 | 第91页 |
| 5.3 斑马鱼hhex突变体纯合子胆管系统发育表型 | 第91-93页 |
| 5.4 斑马鱼hhex突变体纯合子肝内导管的细胞类型研究 | 第93-96页 |
| 第6章 斑马鱼hhex突变体肝内导管细胞来源探究 | 第96-100页 |
| 6.1 斑马鱼hhex突变体纯合子肝内导管的细胞来源研究 | 第96-100页 |
| 第7章 斑马鱼hhex突变体sox9b、cdx1b和pdx1的表达 | 第100-107页 |
| 7.1 斑马鱼hhex突变体纯合子胚胎发育早期的sox9b表达研究 | 第101-103页 |
| 7.2 斑马鱼hhex突变体纯合子cdx1b表达情况 | 第103-105页 |
| 7.3 斑马鱼hhex突变体纯合子pdx1表达情况 | 第105-107页 |
| 第8章 斑马鱼Hhex蛋白对cdx1b和pdx1启动子的转录调节 | 第107-111页 |
| 8.1 斑马鱼Hhex蛋白抑制cdx1b基因启动子的转录活性 | 第108-109页 |
| 8.2 斑马鱼Hhex蛋白抑制pdx1基因启动子的转录活性 | 第109-111页 |
| 第9章 斑马鱼肝脏中Bhmt,Fabp10a的表达及组织稳态维持 | 第111-116页 |
| 9.1 胚胎期斑马鱼肝脏内Bhmt,Fabp10a表达情况 | 第112页 |
| 9.2 成年斑马鱼肝脏内Bhmt,Fabp10a表达情况 | 第112-113页 |
| 9.3 斑马鱼肝脏稳态维持中的肝实质细胞谱系示踪 | 第113-115页 |
| 9.4 斑马鱼肝脏稳态维持中的肝内胆管细胞谱系示踪 | 第115-116页 |
| 第10章 斑马鱼肝脏部分切除手术后的再生 | 第116-131页 |
| 10.1 斑马鱼肝脏部分切除手术后,伤口处Bhmt,Fabp10a表达情况 | 第117页 |
| 10.2 斑马鱼肝脏手术后,Bhmt 阳性,Fabp10a阴性细胞的来源 | 第117-131页 |
| 10.2.1 斑马鱼肝脏手术后再生过程中肝实质细胞的谱系示踪 | 第117-122页 |
| 10.2.2 斑马鱼肝脏手术后再生过程中胆管细胞的谱系示踪 | 第122-125页 |
| 10.2.3 斑马鱼肝脏手术后再生过程中其他类型细胞来源的可能性研究 | 第125-126页 |
| 10.2.4 EdU标记实验分析斑马鱼肝脏手术后伤口处和非伤口处再生细胞的增殖 | 第126-129页 |
| 10.2.5 斑马鱼肝脏手术伤口处的再生受到肝脏组织切除比例的影响 | 第129-131页 |
| 第11章 斑马鱼def~(hi429/+)突变体肝脏手术后再生细胞谱系分析 | 第131-137页 |
| 11.1 斑马鱼def~(hi429/+)突变体稳态维持中的肝实质细胞谱系示踪 | 第132-133页 |
| 11.2 斑马鱼def~(hi429/+)突变体肝脏手术后再生中的肝实质细胞谱系示踪 | 第133-137页 |
| 第12章 结论与讨论 | 第137-147页 |
| 12.1 斑马鱼hhex基因功能研究 | 第137-142页 |
| 12.1.1 斑马鱼hhex基因功能研究的实验结论 | 第137-138页 |
| 12.1.2 对斑马鱼hhex基因功能的相关讨论 | 第138-142页 |
| 12.2 斑马鱼肝脏稳态维持和再生过程中的细胞谱系示踪实验 | 第142-147页 |
| 12.2.1 斑马鱼肝脏稳态维持和再生过程中细胞谱系示踪的实验结论 | 第142-143页 |
| 12.2.2 对斑马鱼肝脏稳态维持和再生过程中细胞谱系的讨论 | 第143-147页 |
| 参考文献 | 第147-162页 |
| 作者筒介 | 第162-164页 |
| 致谢 | 第164-166页 |
