| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 类胡萝卜素概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 类胡萝卜素的结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 类胡萝卜素的性质 | 第11页 |
| 1.1.3 类胡萝卜素的作用 | 第11-12页 |
| 1.2 类胡萝卜素的生物合成 | 第12-13页 |
| 1.3 类胡萝卜素的酶促降解 | 第13-16页 |
| 1.3.1 BCH途径 | 第14页 |
| 1.3.2 Lox途径 | 第14页 |
| 1.3.3 CCD途径 | 第14-16页 |
| 1.4 烟草类胡萝卜素代谢的调节 | 第16-18页 |
| 2 引言 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-29页 |
| 3.1 烟草类胡萝卜素降解关键基因CCD1的克隆与生物信息学分析 | 第19页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第19页 |
| 3.1.2 CCD1全长基因的克隆 | 第19页 |
| 3.1.3 序列分析 | 第19页 |
| 3.2 烟草类胡萝卜素代谢及降解关键基因CCD1的表达分析 | 第19-25页 |
| 3.2.1 CCD1基因在不同组织的表达分析 | 第19-20页 |
| 3.2.2 不同生态区不同烟叶风格CCD1基因表达规律及物质代谢研究 | 第20页 |
| 3.2.2.1 材料 | 第20页 |
| 3.2.2.2 半定量RT-PCR | 第20页 |
| 3.2.2.3 色素含量的测定 | 第20页 |
| 3.2.3 浓香型亚生态区典型烟叶物质代谢和CCD1基因表达比较研究 | 第20-21页 |
| 3.2.4 CCD1基因过表达及抑制表达载体的构建及转化 | 第21-23页 |
| 3.2.4.1 过表达载体构建及检测 | 第21-22页 |
| 3.2.4.2 RNAi表达载体构建及检测 | 第22-23页 |
| 3.2.5 原核表达载体的构建 | 第23-25页 |
| 3.3 转基因阳性植株的获得 | 第25-27页 |
| 3.3.1 K326无菌苗的诱导 | 第25页 |
| 3.3.2 菌株活化 | 第25页 |
| 3.3.3 转化方案及转化植株的筛选 | 第25-27页 |
| 3.4 转化植株的检测 | 第27页 |
| 3.5 原核表达的蛋白表达与纯化 | 第27-28页 |
| 3.6 数据处理 | 第28-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-47页 |
| 4.1 CCD1基因的克隆与序列分析 | 第29-35页 |
| 4.1.1 K326总RNA的提取 | 第29页 |
| 4.1.2 CCD1基因的克隆 | 第29-30页 |
| 4.1.3 CCD1基因和蛋白序列的分析 | 第30-32页 |
| 4.1.4 蛋白质结构域分析 | 第32页 |
| 4.1.5 蛋白质疏水性/亲水性分析、跨膜区预测和螺旋卷曲分析 | 第32-33页 |
| 4.1.6 CCD蛋白质信号肽分析 | 第33页 |
| 4.1.7 CCD蛋白质导肽分析 | 第33页 |
| 4.1.8 蛋白质二级结构分析 | 第33-34页 |
| 4.1.9 蛋白质三级结构模拟 | 第34页 |
| 4.1.10 CCD1基因的系统发育分析 | 第34-35页 |
| 4.2 烟草类胡萝卜素代谢及降解关键基因CCD1的表达分析 | 第35-40页 |
| 4.2.1 CCD1基因在不同组织的表达分析 | 第35-36页 |
| 4.2.2 不同生态区不同烟叶风格CCD1基因表达规律及物质代谢研究 | 第36-37页 |
| 4.2.3 浓香型亚生态区典型烟叶物质代谢和基因表达比较研究 | 第37-40页 |
| 4.2.3.1 浓香型亚生态区类胡萝卜素代谢关键基因表达比较研究 | 第37页 |
| 4.2.3.2 河南地区不同品种类胡萝卜素代谢关键基因表达比较研究 | 第37-38页 |
| 4.2.3.3 安徽地区不同品种类胡萝卜素代谢关键基因表达比较研究 | 第38-39页 |
| 4.2.3.4 广东地区不同品种类胡萝卜素代谢关键基因表达比较研究 | 第39-40页 |
| 4.2.3.5 浓香型不同亚生态区典型烟叶类胡萝卜素色素代谢比较研究 | 第40页 |
| 4.3 CCD1基因表达载体的构建、转化与转基因阳性植株的获得 | 第40-45页 |
| 4.3.1 转CCD1基因过表达载体的获得 | 第40-41页 |
| 4.3.2 RNAi表达载体构建 | 第41-42页 |
| 4.3.3 表达载体转化农杆菌 | 第42-43页 |
| 4.3.4 转基因植株的获得 | 第43-44页 |
| 4.3.5 转基因烟草植株的阳性检测 | 第44-45页 |
| 4.4 CCD1蛋白原核表达 | 第45-47页 |
| 4.4.1 原核表达载体构建 | 第45-46页 |
| 4.4.2 重组质粒诱导表达与表达形式鉴定 | 第46-47页 |
| 5 结论与讨论 | 第47页 |
| 6 需要进一步开展的工作 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| ABSTRACT | 第56-57页 |
| 附录 | 第58-62页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第62页 |
