| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1. 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 油桐的生理特性 | 第12-13页 |
| 1.2 油桐的价值 | 第13-14页 |
| 1.2.1 工业原料 | 第13页 |
| 1.2.2 生物能源原料 | 第13-14页 |
| 1.2.3 药用价值 | 第14页 |
| 1.3 植物油脂合成的过程及研究现状 | 第14-16页 |
| 1.4 乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因的结构、分类及应用 | 第16-18页 |
| 1.4.1 ACCase的结构与分类 | 第16-18页 |
| 1.4.2 ACCase的功能 | 第18页 |
| 1.5 乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因研究进展及展望 | 第18-21页 |
| 1.5.1 异质型ACCase基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5.2 同质型ACCase基因的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5.3 乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因的研究展望 | 第20-21页 |
| 1.6 目的意义及技术路线 | 第21-22页 |
| 2. 油桐ACCase基因的cDNA克隆及序列分析 | 第22-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 油桐种子总RNA的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的反转录合成 | 第24-25页 |
| 2.2.3 油桐ACCase基因的序列查询 | 第25页 |
| 2.2.4 油桐ACCase基因克隆的引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.5 PCR扩增程序 | 第26-27页 |
| 2.2.6 扩增产物的检测及回收 | 第27页 |
| 2.2.7 回收DNA产物的连接、转化 | 第27-28页 |
| 2.2.8 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-56页 |
| 2.3.1 油桐总RNA的提取及第一链cDNA的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.2 油桐ACCase基因的cDNA克隆 | 第30-37页 |
| 2.3.3 油桐ACCase蛋白质特性及亲水性的预测结果 | 第37-41页 |
| 2.3.4 油桐ACCase跨膜结构预测及功能域确定 | 第41-44页 |
| 2.3.5 油桐ACCase蛋白质的二级结构预测 | 第44-47页 |
| 2.3.6 油桐ACCase蛋白的三级结构预测 | 第47-50页 |
| 2.3.7 油桐ACCase蛋白的同源性及聚类分析 | 第50-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-58页 |
| 3 油桐ACCase基因的基因组序列的克隆 | 第58-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第58页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第58页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第58页 |
| 3.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 3.2.1 油桐基因组DNA的提取 | 第58-59页 |
| 3.2.2 ACCase基因组扩增引物设计 | 第59-60页 |
| 3.2.3 基因组PCR扩增 | 第60页 |
| 3.2.4 基因组DNA长度的判断和分段设计引物 | 第60-61页 |
| 3.2.5 基因组DNA的PCR扩增 | 第61-62页 |
| 3.2.6 PCR产物的回收和连接转化 | 第62页 |
| 3.2.7 阳性克隆的筛选及测序 | 第62页 |
| 3.3 结果与分析 | 第62-65页 |
| 3.3.1 油桐基因组DNA的提取 | 第62-63页 |
| 3.3.2 LA Taq酶扩增结果 | 第63页 |
| 3.3.3 ACCase基因组DNA序列克隆 | 第63-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-66页 |
| 4 油桐ACCase基因的表达模式研究 | 第66-80页 |
| 4.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第66页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第66页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第66-67页 |
| 4.2 实验方法 | 第67-71页 |
| 4.2.1 样品RNA的提取及荧光定量cDNA的制备 | 第67-68页 |
| 4.2.2 内参引物的选择 | 第68页 |
| 4.2.3 荧光定量特异引物的设计 | 第68页 |
| 4.2.4 目的基因及内参基因片段的克隆 | 第68-70页 |
| 4.2.5 荧光定量标准曲线的制作 | 第70-71页 |
| 4.2.6 实时荧光定量分析 | 第71页 |
| 4.3 结果与分析 | 第71-79页 |
| 4.3.1 目的基因及内参基因的特异引物PCR检测 | 第71-72页 |
| 4.3.2 目的基因及内参基因标准曲线的制备 | 第72-74页 |
| 4.3.3 ACCase基因在不同组织器官及种子不同发育时期的相对表达量 | 第74-79页 |
| 4.4 讨论 | 第79-80页 |
| 5 油桐ACCase基因的真核表达 | 第80-98页 |
| 5.1 实验材料 | 第80-81页 |
| 5.2 实验试剂 | 第81页 |
| 5.3 实验设备 | 第81-82页 |
| 5.4 实验方法 | 第82-91页 |
| 5.4.1 中间过渡性质粒载体pCAMBIA1304-35S的验证 | 第82-83页 |
| 5.4.2 载体构建的引物设计 | 第83-84页 |
| 5.4.3 载体构建目的片段的制备 | 第84-85页 |
| 5.4.4 载体构建载体的制备 | 第85页 |
| 5.4.5 目的片段与载体的连接 | 第85-86页 |
| 5.4.6 重组载体电击化法转化农杆菌 | 第86-87页 |
| 5.4.7 野生型烟草的叶片的获取 | 第87-88页 |
| 5.4.8 用叶盘法转化烟草 | 第88-89页 |
| 5.4.9 野生型拟南芥植株的培养 | 第89-90页 |
| 5.4.10 花粉管通道法转化拟南芥 | 第90-91页 |
| 5.5 结果与分析 | 第91-95页 |
| 5.5.1 中间过渡性质粒载体pCAMBIA1304-35S的验证 | 第91-92页 |
| 5.5.2 重组载体的构建 | 第92页 |
| 5.5.3 转入农杆菌后的阳性鉴定 | 第92-93页 |
| 5.5.4 转基因烟草的获得及阳性植株的鉴定 | 第93-95页 |
| 5.5.5 转基因拟南芥的获得及T1代种子的筛选 | 第95页 |
| 5.6 讨论 | 第95-98页 |
| 6 结论与创新 | 第98-100页 |
| 6.1 结论 | 第98-99页 |
| 6.2 创新点 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-110页 |
| 附录A：常用实验药品配方 | 第110-112页 |
| 附录B：攻读硕士学位期间的主要学术成果 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
