| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 乳腺生物反应器 | 第10-13页 |
| 1.1 乳腺生物反应器的特点 | 第11-12页 |
| 1.2 乳腺生物反应器的研究应用 | 第12页 |
| 1.3 乳腺生物反应器生产重组人组织纤溶酶原激活剂 | 第12-13页 |
| 2 人组织纤溶酶原激活剂 | 第13-17页 |
| 2.1 人组织纤溶酶原激活剂的结构与功能 | 第13-16页 |
| 2.2 重组人组织纤溶酶原激活剂的研究应用 | 第16-17页 |
| 3 显微注射法制备乳腺特异性表达转基因动物 | 第17页 |
| 4 转基因纯合子动物的特性研究 | 第17-18页 |
| 5 乳腺生物反应器生产乳蛋白的分离纯化 | 第18-24页 |
| 5.1 乳中主要蛋白质的分析及重组蛋白分离的特点 | 第19-21页 |
| 5.2 乳蛋白分离纯化技术 | 第21-22页 |
| 5.2.1 亲和层析 | 第21页 |
| 5.2.2 离子交换层析 | 第21-22页 |
| 5.2.3 凝胶过滤层析 | 第22页 |
| 5.3 人组织纤溶酶原激活剂及其变体的分离纯化研究 | 第22-24页 |
| 第二章 重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)转基因兔的制备及筛选 | 第24-41页 |
| 1 实验材料 | 第25-27页 |
| 1.1 实验动物 | 第25页 |
| 1.2 主要器材 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂及配制 | 第25-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.1 转基因兔的制备 | 第27-30页 |
| 2.1.1 构建及基因片段的准备 | 第27-28页 |
| 2.1.2 超数排卵与同期发情 | 第28页 |
| 2.1.3 回收受精卵 | 第28页 |
| 2.1.4 受精卵显微注射 | 第28-29页 |
| 2.1.5 胚胎移植 | 第29-30页 |
| 2.2 转基因兔的整合检测 | 第30-31页 |
| 2.2.1 兔基因组的提取 | 第30页 |
| 2.2.2 PCR检测与测序 | 第30-31页 |
| 2.3 转基因兔乳腺表达产物分析 | 第31-34页 |
| 2.3.1 兔乳汁的收集与提取 | 第31-32页 |
| 2.3.2 ELISA法检测转基因兔乳清 | 第32页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE电泳法分析转基因兔乳清 | 第32-33页 |
| 2.3.4 Western Blot分析转基因兔乳清 | 第33页 |
| 2.3.5 FAPA法检测表达产物的体外溶栓生物活性功能 | 第33-34页 |
| 2.4 转基因纯合子兔的筛选培育 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-40页 |
| 3.1 转基因兔的获得及筛选 | 第34-35页 |
| 3.2 转rhPA基因纯合子兔的筛选 | 第35-37页 |
| 3.3 转基因兔乳腺表达产物分析 | 第37-40页 |
| 3.3.1 转基因兔乳清的ELISA检测 | 第37-38页 |
| 3.3.2 转基因兔乳清的SDS-PAGE电泳和Western Blot检测 | 第38-39页 |
| 3.3.3 体外溶栓检测 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 转基因兔乳中rhPA的分离纯化及鉴定 | 第41-70页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 rhPA乳样 | 第42页 |
| 1.2 主要器材和仪器 | 第42页 |
| 1.3 主要试剂与配制 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-49页 |
| 2.1 转基因兔乳前处理 | 第43-45页 |
| 2.1.1 乳清的提取 | 第43页 |
| 2.1.2 硫酸铵沉淀 | 第43-45页 |
| 2.1.3 酸碱沉淀 | 第45页 |
| 2.1.4 超滤 | 第45页 |
| 2.2 亲和层析纯化转基因兔乳中rhPA | 第45-47页 |
| 2.2.1 赖氨酸亲和层析(Lysine HyperD)纯化乳清 | 第45-47页 |
| 2.2.2 染料亲和层析(Blue Sepharose 6FF)纯化乳清 | 第47页 |
| 2.3 离子交换层析(SP Bestarose~(TM) FF)纯化转基因兔乳中rhPA | 第47-48页 |
| 2.4 凝胶过滤层析(Surpdex G75)纯化转基因兔乳中rhPA | 第48-49页 |
| 2.5 ELISA、SDS-PAGE、Western Blot法分析纯化产物 | 第49页 |
| 2.6 FAPA法检测表达产物的体外溶栓生物活性功能 | 第49页 |
| 2.7 分子量及序列测定(N端/C端)鉴定纯化产物 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-68页 |
| 3.1 乳样前处理的结果 | 第49-50页 |
| 3.2 赖氨酸亲和层析(Lysine HyperD)纯化结果 | 第50-53页 |
| 3.3 染料亲和层析(Blue Sepharose 6FF)纯化结果 | 第53-56页 |
| 3.4 离子交换层析(SP Bestarose~(TM）FF)纯化结果 | 第56-58页 |
| 3.5 凝胶过滤层析(Surpdex G75)纯化结果 | 第58-60页 |
| 3.6 纯化产物的初步鉴定 | 第60-62页 |
| 3.7 FAPA法检测纯化产物体外溶栓生物活性功能 | 第62-63页 |
| 3.8 分子量及序列测定(N端/C端)鉴定纯化产物 | 第63-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 全文总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
