| CONTENTS | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1 引言 | 第13-27页 |
| 1.1 抑制消减杂交(SSH)技术 | 第13-14页 |
| 1.1.1 抑制消减杂交技术的原理 | 第13-14页 |
| 1.1.2 抑制消减杂交技术在植物差异基因表达中的应用 | 第14页 |
| 1.2 植物器官离体再生 | 第14-17页 |
| 1.2.1 植物组织培养和发展 | 第14-15页 |
| 1.2.2 植物离体器官再生概述 | 第15-16页 |
| 1.2.3 体细胞胚胎发生的基因表达机理 | 第16页 |
| 1.2.4 大豆再生体系研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.5 再生相关基因克隆和鉴定 | 第17页 |
| 1.3 细胞分裂素的信号转导 | 第17-23页 |
| 1.3.1 细胞分裂素的发现、种类和化学结构 | 第17-18页 |
| 1.3.2 细胞分裂素的分布和运输 | 第18页 |
| 1.3.3 细胞分裂素的生物合成和代谢 | 第18-19页 |
| 1.3.4 细胞分裂素的信号转导途径 | 第19-20页 |
| 1.3.5 细胞分裂素的生理作用和应用 | 第20-21页 |
| 1.3.6 细胞分裂素信号途径基因间相互作用 | 第21-23页 |
| 1.4 VSPB基因的研究概况 | 第23-25页 |
| 1.4.1 VSPB基因的发现 | 第23页 |
| 1.4.2 植物营养贮存蛋白基因表达的调控 | 第23-25页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-47页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第27页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-47页 |
| 2.2.1 抑制消减杂交 | 第27-33页 |
| 2.2.2 抑制消减杂交文库的构建 | 第33-36页 |
| 2.2.3 GmVSPB基因的克隆及序列分析 | 第36-38页 |
| 2.2.4 GmVSPB基因的生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 2.2.5 GmVSPB基因的植物表达载体构建 | 第39-40页 |
| 2.2.6 农杆菌的制备及转化 | 第40-41页 |
| 2.2.7 叶盘法转化烟草 | 第41-42页 |
| 2.2.8 花序浸染法转化拟南芥 | 第42页 |
| 2.2.9 子叶节法转化大豆 | 第42-44页 |
| 2.2.10 转基因植株的检测 | 第44-45页 |
| 2.2.11 GmVSPB基因的组织特异性表达 | 第45页 |
| 2.2.12 细胞分裂素(6-BA)对GmVSPB基因的表达影响分析 | 第45-46页 |
| 2.2.13 细胞分裂素(6-BA)对转GmVSPB基因大豆根长和侧根的影响 | 第46页 |
| 2.2.14 细胞分裂素(6-BA)对过表达烟草不定芽再生的影响 | 第46页 |
| 2.2.15 细胞分裂素(6-BA)对过表达拟南芥萌发的影响 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-67页 |
| 3.1 抑制消减杂交 | 第47-49页 |
| 3.1.1 大豆子叶节的总RNA的提取 | 第47页 |
| 3.1.2 SMART技术合成cDNA | 第47页 |
| 3.1.3 双链cDNA的RsaI酶酶切结果 | 第47-48页 |
| 3.1.4 消减杂交后两次PCR扩增的结果分析 | 第48-49页 |
| 3.2 抑制消减杂交文库的构建 | 第49-55页 |
| 3.2.1 PCR扩增消减文库中的插入片段 | 第49-50页 |
| 3.2.2 EST测序与同源性检索结果 | 第50-52页 |
| 3.2.3 GmVSPB基因的生物信息学分析 | 第52-55页 |
| 3.3 GmVSPB基因的克隆 | 第55-59页 |
| 3.3.1 目的片段的扩增 | 第55-56页 |
| 3.3.2 GmVSPB基因的植物表达载体构建 | 第56-58页 |
| 3.3.3 GmVSPB植物表达载体转化大肠杆菌 | 第58页 |
| 3.3.4 GmVSPB植物表达载体转化农杆菌 | 第58-59页 |
| 3.4 烟草、拟南芥和大豆的遗传转化 | 第59-60页 |
| 3.5 烟草、拟南芥和大豆过表达植株的检测 | 第60-62页 |
| 3.5.1 过表达烟草T_0代检测 | 第60-61页 |
| 3.5.2 过表达拟南芥的检测 | 第61-62页 |
| 3.5.3 过表达大豆的检测 | 第62页 |
| 3.6 GmVSPB基因的组织特异性表达 | 第62-63页 |
| 3.7 细胞分裂素(6-BA)对GmVSPB基因的表达影响分析 | 第63页 |
| 3.8 细胞分裂素(6-BA)对转GmVSPB基因大豆根长和侧根的影响 | 第63-65页 |
| 3.9 细胞分裂素(6-BA)对过表达拟南芥萌发的影响 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 4.1 构建SSH cDNA文库的选材及诱导时间筛选 | 第67页 |
| 4.2 大豆抑制再生消减杂交文库构建的比较分析 | 第67-68页 |
| 4.3 抑制消减杂交(SSH)技术的优缺点 | 第68-69页 |
| 4.4 新兴筛选表达差异基因的方法 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 | 第80-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第82页 |
