| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第12-14页 |
| 1 绪论 | 第14-50页 |
| 1.1 立题依据与意义 | 第14-16页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第16-48页 |
| 1.2.1 Nrf1的发现 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Nrf1的亚型及特征 | 第17-19页 |
| 1.2.3 Nrf1的分子结构及其功能 | 第19-26页 |
| 1.2.4 Nrf1调控的下游基因 | 第26-30页 |
| 1.2.5 Nrf1的转录、翻译后加工修饰与调控 | 第30-38页 |
| 1.2.6 Nrf1的生理学功能 | 第38-44页 |
| 1.2.7 Nrf1参与的信号通路 | 第44-46页 |
| 1.2.8 Nrf1与Nrf2的差异 | 第46-48页 |
| 1.3 研究目的与内容 | 第48-49页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第48页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第48-49页 |
| 1.4 创新之处 | 第49页 |
| 1.5 技术路线 | 第49-50页 |
| 2 实验材料与方法 | 第50-72页 |
| 2.1 实验材料 | 第50-57页 |
| 2.1.1 实验细胞株 | 第50页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第50-52页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第52-54页 |
| 2.1.4 抗体 | 第54-55页 |
| 2.1.5 实验中主要试剂配制 | 第55-57页 |
| 2.1.6 引物设计 | 第57页 |
| 2.2 实验方法 | 第57-72页 |
| 2.2.1 细胞复苏、培养、传代、种板和冻存 | 第57-58页 |
| 2.2.2 细胞总RNA提取 | 第58-59页 |
| 2.2.3 反转录与实时荧光定量PCR | 第59-61页 |
| 2.2.4 感受态制备 | 第61页 |
| 2.2.5 质粒构建 | 第61-65页 |
| 2.2.6 DNA片段纯化回收 | 第65页 |
| 2.2.7 质粒转化、扩增、提取 | 第65-66页 |
| 2.2.8 质粒、siRNA转染 | 第66-67页 |
| 2.2.9 Cas9敲除细胞株构建 | 第67页 |
| 2.2.10 蛋白提取与处理 | 第67页 |
| 2.2.11 BCA蛋白定量 | 第67-68页 |
| 2.2.12 蛋白样品准备 | 第68页 |
| 2.2.13 氧化还原处理蛋白样品 | 第68-69页 |
| 2.2.14 免疫印迹 | 第69-70页 |
| 2.2.15 双荧光报告基因活性检测 | 第70-71页 |
| 2.2.16 数据统计与分析 | 第71-72页 |
| 3 Nrf1蛋白质N端加工的发现 | 第72-80页 |
| 3.1 引言 | 第72页 |
| 3.2 实验材料 | 第72-73页 |
| 3.3 实验结果 | 第73-77页 |
| 3.3.1 AD1结构域对Nrf1蛋白质加工的影响 | 第73-75页 |
| 3.3.2 NTD结构域对Nrf1蛋白质加工的影响 | 第75-77页 |
| 3.4 讨论 | 第77-78页 |
| 3.5 小结 | 第78-80页 |
| 4 UBL结构域介导Nrf1 N端加工 | 第80-98页 |
| 4.1 引言 | 第80页 |
| 4.2 实验材料 | 第80-81页 |
| 4.3 实验结果 | 第81-96页 |
| 4.3.1 UBL结构域的预测 | 第81-83页 |
| 4.3.2 N端电荷状态决定Nrf1的跨膜结构 | 第83-85页 |
| 4.3.3 N端加工小肽的发现 | 第85-92页 |
| 4.3.4 UBL结构域控制12.5 kDa小肽的产生 | 第92-96页 |
| 4.4 讨论 | 第96-97页 |
| 4.5 小结 | 第97-98页 |
| 5 影响Nrf1 N端12.5 kDa小肽加工的因素 | 第98-114页 |
| 5.1 引言 | 第98页 |
| 5.2 实验材料 | 第98-99页 |
| 5.3 实验结果 | 第99-112页 |
| 5.3.1 Nrf1的N端加工依赖于内质网 | 第99-101页 |
| 5.3.2 p97对Nrf1 N端翻转的影响 | 第101-102页 |
| 5.3.3 蛋白酶体、泛素化修饰对N端12.5 kDa小肽加工产生的影响 | 第102-108页 |
| 5.3.4 UBL蛋白对Nrf1 N端加工产生12.5 kDa小肽 | 第108-110页 |
| 5.3.5 氧化还原状态与pH改变对Nrf1加工与聚集的影响 | 第110-112页 |
| 5.4 讨论 | 第112-113页 |
| 5.5 小结 | 第113-114页 |
| 6 跨膜拓扑结构调控N298的选择性加工过程 | 第114-126页 |
| 6.1 引言 | 第114页 |
| 6.2 实验材料 | 第114-115页 |
| 6.3 实验结果 | 第115-122页 |
| 6.3.1 p97、DDI-1、泛素化修饰在NTD、N298翻译后加工中的关系 | 第115-117页 |
| 6.3.2 Gal4D-N298的跨膜拓扑结构调控 | 第117-120页 |
| 6.3.3 N298-Gal4D-VP16的跨膜拓扑结构调控 | 第120-122页 |
| 6.4 讨论 | 第122-124页 |
| 6.5 小结 | 第124-126页 |
| 7 内源性Nrf1蛋白特性的鉴定 | 第126-142页 |
| 7.1 引言 | 第126-128页 |
| 7.2 实验材料 | 第128页 |
| 7.3 实验结果 | 第128-138页 |
| 7.3.1 PAGE胶中Nrf1的分子量大小鉴定 | 第128-131页 |
| 7.3.2 内源性Nrf1主要亚型对蛋白酶体抑制剂的剂量依赖性 | 第131-136页 |
| 7.3.3 内源性Nrf1主要亚型对蛋白酶体抑制剂时间上的依赖性 | 第136-138页 |
| 7.4 讨论 | 第138-139页 |
| 7.5 小结 | 第139-142页 |
| 8 内源性Nrf1翻译后修饰加工机制 | 第142-164页 |
| 8.1 引言 | 第142页 |
| 8.2 实验材料 | 第142-143页 |
| 8.3 实验结果 | 第143-161页 |
| 8.3.1 p97对内源性Nrf1主要亚型的影响 | 第143-147页 |
| 8.3.2 糖基化修饰对内源性Nrf1主要亚型的影响 | 第147-151页 |
| 8.3.3 泛素化修饰对内源性Nrf1主要亚型的影响 | 第151-154页 |
| 8.3.4 DDI对内源性Nrf1主要亚型的影响 | 第154-157页 |
| 8.3.5 Nrf1、Nrf2在高低浓度蛋白酶体抑制剂刺激条件下的作用 | 第157-159页 |
| 8.3.6 蛋白酶体抑制剂导致内质网应激 | 第159-161页 |
| 8.4 讨论 | 第161-162页 |
| 8.5 小结 | 第162-164页 |
| 9 结论与展望 | 第164-168页 |
| 9.1 主要结论 | 第164-166页 |
| 9.2 课题后续工作展望 | 第166-168页 |
| 致谢 | 第168-170页 |
| 参考文献 | 第170-184页 |
| 附录 | 第184页 |
| A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第184页 |
| B. 作者在攻读学位期间参加科研项目情况 | 第184页 |
