| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一部分 综述 | 第12-17页 |
| 第一章 鸭圆环病毒致病性及疫苗研究进展 | 第12-17页 |
| 1. 基因结构 | 第12-13页 |
| 2. 流行病学特征 | 第13页 |
| 3. 致病机制 | 第13-14页 |
| 4. 疫苗研制 | 第14-16页 |
| 5. 小结 | 第16-17页 |
| 第二部分 试验研究 | 第17-51页 |
| 第二章 基于DucV Cap基因的重组质粒构建及表达 | 第17-32页 |
| 1. 材料 | 第17-19页 |
| 1.1 毒株、质粒和细胞等 | 第17页 |
| 1.2 主要试剂及配制 | 第17-18页 |
| 1.3 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2. 试验方法 | 第19-24页 |
| 2.1 DuCV Cap与tPA基因的序列分析 | 第19页 |
| 2.2 真核表达质粒构建 | 第19-22页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第19页 |
| 2.2.2 目的基因的PCR扩增与片段融合 | 第19-21页 |
| 2.2.3 目的片段的T载体克隆 | 第21页 |
| 2.2.4 T载体克隆的鉴定 | 第21页 |
| 2.2.5 目的片段的表达载体克隆 | 第21-22页 |
| 2.3 真核表达质粒转染 | 第22-23页 |
| 2.3.1 表达质粒的提取 | 第22-23页 |
| 2.3.2 COS7细胞的复苏与培养 | 第23页 |
| 2.3.3 细胞转染 | 第23页 |
| 2.4 目的基因的真核表达检测 | 第23-24页 |
| 2.4.1 IFA检测目 | 第23-24页 |
| 2.4.2 Western blot检测 | 第24页 |
| 3. 结果 | 第24-30页 |
| 3.1 DuCV Cap的基因序列分析及tPA'序列的获得 | 第24页 |
| 3.1.1 NLS序列位置及抗原表位分析 | 第24页 |
| 3.1.2 tPA′序列的获得 | 第24页 |
| 3.2 基因片段DuCV Cap、Cap△NLS、tPA′-Cap△NLS的扩增 | 第24-25页 |
| 3.2.1 DuCV Cap、 tPA′′、Cap△NLS的片段扩增 | 第24-25页 |
| 3.2.2 tPA'-Cap△NLS融合片段的获得 | 第25页 |
| 3.3 T克隆质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| 3.4 重组真核表达质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| 3.5 重组质粒的表达检测 | 第27-30页 |
| 3.5.1 IFA检测重组质粒的表达 | 第27-29页 |
| 3.5.2 Western blot检测分泌蛋白的表达 | 第29-30页 |
| 4. 讨论 | 第30-31页 |
| 5. 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 DNA疫苗pcDNA3.1-Cap、pcDNA3.1-Cap-Cap△NLS和pcDNA3.1-Cap-tPA'-Cap△NLS的免疫原性研究 | 第32-50页 |
| 1. 试验材料 | 第32-33页 |
| 1.1 菌种、血清及毒株 | 第32页 |
| 1.2 试验动物 | 第32-33页 |
| 1.3 主要试剂及其配制 | 第33页 |
| 1.4 主要仪器 | 第33页 |
| 2. 方法 | 第33-39页 |
| 2.1 引物设计 | 第33-34页 |
| 2.2 测定DuCV-GH01株的半数感染量(ID_(50)) | 第34-35页 |
| 2.2.1 DuCV标准质粒及标准曲线构建 | 第34-35页 |
| 2.2.2 ID_(50)检测 | 第35页 |
| 2.3 重组质粒免疫雏鸭 | 第35-37页 |
| 2.3.1 重组质粒的大量提取 | 第35页 |
| 2.3.2 动物免疫 | 第35-36页 |
| 2.3.3 实验样品采集 | 第36-37页 |
| 2.4 各DNA疫苗的免疫原性及抗DuCV感染检测 | 第37-39页 |
| 2.4.1 血清中特异性抗体效价的间接ELISA检测 | 第37-38页 |
| 2.4.2 鸭外周血中CD4~+CD8~+、IL-4、IL-10、IL-12和IFN-γ含量的qPCR检测 | 第38页 |
| 2.4.3 鸭脾脏组织中病毒含量的qPCR检测 | 第38-39页 |
| 3. 结果 | 第39-47页 |
| 3.1 DuCVGH01株ID_(50)的测定 | 第39-40页 |
| 3.1.1 病毒悬液中DuCV拷贝数的检测 | 第39页 |
| 3.1.2 DuCV GH01株ID_(50)的确定 | 第39-40页 |
| 3.2 各免疫组的鸭血清中特异性抗体的检测 | 第40-41页 |
| 3.2.1 间接ELISA方法最佳抗原包被量、最佳血清稀释度和cut-off值的确定 | 第40页 |
| 3.2.2 鸭血清中Cap蛋白特异性抗体消长规律的检测结果 | 第40-41页 |
| 3.3 各免疫组的鸭外周血中细胞因子的检测 | 第41-45页 |
| 3.3.1 CD4~+和CD8~+检测结果 | 第41-42页 |
| 3.3.2 IL-4检测结果 | 第42-43页 |
| 3.3.3 IL-10检测结果 | 第43-44页 |
| 3.3.4 IL-12检测结果 | 第44页 |
| 3.3.5 IFN-γ检测结果 | 第44-45页 |
| 3.4 各DNA疫苗的抗DuCV感染力检测 | 第45-47页 |
| 3.4.1 临床症状检测 | 第45页 |
| 3.4.2 免疫组织重量检测结果 | 第45-46页 |
| 3.4.3 脾脏中DuCV拷贝数检测结果 | 第46-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-50页 |
| 5. 小结 | 第50页 |
| 总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
