| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 文献与综述 | 第13-24页 |
| ·酵母的工业应用前景 | 第13-15页 |
| ·P.pastoris表达系统发展简史 | 第14页 |
| ·外源蛋白在P.pastoris中的表达研究 | 第14-15页 |
| ·影响P.pastoris表达系统发展的因素以及可能的解决办法 | 第15页 |
| ·酵母凋亡研究进展 | 第15-18页 |
| ·酵母凋亡的机制 | 第15-18页 |
| ·内源性启动 | 第15-16页 |
| ·酵母凋亡因子Birlp | 第16-17页 |
| ·外源性诱导 | 第17页 |
| ·凋亡基因在酵母中的异源表达 | 第17-18页 |
| ·酵母凋亡与细胞周期 | 第18页 |
| ·研究酵母凋亡的生理学意义 | 第18页 |
| ·survivin研究进展 | 第18-23页 |
| ·survivin的结构 | 第19-20页 |
| ·survivin的生物学功能 | 第20-23页 |
| ·本研究的思路与目标 | 第23-24页 |
| 第2章 Birlp与Survivin的基因与蛋白的生物信息学分析 | 第24-32页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料和方法 | 第24页 |
| ·材料来源 | 第24页 |
| ·分析软件 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-31页 |
| ·酵母凋亡基因birl分析 | 第24-28页 |
| ·核苷酸序列 | 第24-25页 |
| ·氨基酸组成和理化性质分析 | 第25-26页 |
| ·富亮氨酸的核分泌信号和信号肽预测 | 第26-27页 |
| ·卷曲螺旋的预测 | 第27页 |
| ·Motifs分析和结构功能域预测 | 第27-28页 |
| ·三级结构模型 | 第28页 |
| ·survivin基因分析 | 第28-31页 |
| ·核苷酸序列 | 第28-29页 |
| ·氨基酸组成和理化性质分析 | 第29页 |
| ·富亮氨酸的核分泌信号和信号肽预测 | 第29-30页 |
| ·survivin的单体结构特征 | 第30页 |
| ·survivin蛋白单体结构模拟图 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第3章 组成型表达survivin对毕赤酵母的作用研究 | 第32-53页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·实验材料与方法 | 第32-42页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·引物与质粒 | 第32-34页 |
| ·主要酶与试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34-35页 |
| ·培养基及试剂配制 | 第35-36页 |
| ·酵母X33菌株基因组DNA的小量提取方法 | 第36页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第36-37页 |
| ·扩增反应 | 第36-37页 |
| ·核酸电泳产物的回收方法 | 第37页 |
| ·质粒构建方法 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA提取 | 第37-38页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第38页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第38-40页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·细菌质粒的转化 | 第39页 |
| ·构建质粒向酵母内的转化 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白在毕赤酵母X33中的表达方法 | 第40页 |
| ·毕赤酵母OD_(600)的测定和生长曲线的绘制 | 第40-41页 |
| ·MTT法测定酵母细胞的死活比例 | 第41页 |
| ·流式细胞仪测定细胞凋亡和死亡数量比例 | 第41-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-51页 |
| ·重组质粒的构建 | 第42-47页 |
| ·pGAPZA-survivin(T34A)质粒的构建 | 第42-45页 |
| ·流程示意图 | 第42-44页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第44页 |
| ·双酶切鉴定 | 第44页 |
| ·测序比对 | 第44-45页 |
| ·pGAPZA-survivin质粒的构建 | 第45-47页 |
| ·流程示意图 | 第45-46页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第46页 |
| ·双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·测序比对 | 第47页 |
| ·重组质粒转化酵母及鉴定 | 第47-48页 |
| ·酵母的转化 | 第47页 |
| ·酵母基因组的提取及PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组毕赤酵母的凋亡检测 | 第48-51页 |
| ·生长曲线的测定与绘制 | 第48-49页 |
| ·MTT法测定酵母凋亡抑制率结果 | 第49-50页 |
| ·核酸电泳法测定凋亡细胞DNA结果 | 第50页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 第4章 诱导型表达survivin对毕赤酵母的作用研究 | 第53-65页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料与方法 | 第53-55页 |
| ·菌株 | 第53页 |
| ·引物与质粒 | 第53-55页 |
| ·主要酶与试剂 | 第55页 |
| ·实验仪器 | 第55页 |
| ·培养基及试剂配制 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-64页 |
| ·重组质粒的构建 | 第55-59页 |
| ·pGAPZA-survivin(T34A)质粒的构建 | 第55-57页 |
| ·流程示意图 | 第55-57页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第57页 |
| ·双酶切鉴定 | 第57页 |
| ·测序比对 | 第57页 |
| ·pGAPZA-survivin质粒的构建 | 第57-59页 |
| ·流程示意图 | 第57-59页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第59页 |
| ·双酶切鉴定 | 第59页 |
| ·测序比对 | 第59页 |
| ·重组质粒转化酵母及鉴定 | 第59-60页 |
| ·酵母的转化 | 第60页 |
| ·酵母基因组的提取及PCR鉴定 | 第60页 |
| ·重组毕赤酵母的凋亡检测 | 第60-64页 |
| ·生长曲线的测定与绘制 | 第60-62页 |
| ·MTT法测定酵母凋亡抑制率结果 | 第62页 |
| ·核酸电泳法测定凋亡细胞DNA结果 | 第62-63页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第5章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 发表文章 | 第74-75页 |
