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鸭群中禽白血病病毒的核酸检测

符号及缩略词第4-10页
中文摘要第10-11页
Abstract第11-12页
1 引言第13-28页
    1.1 禽白血病的研究概述第13-14页
    1.2 病原学第14-20页
        1.2.1 分类第14页
        1.2.2 病毒形态第14-15页
        1.2.3 化学组成第15页
        1.2.4 基因组结构与功能第15-17页
        1.2.5 病毒复制第17-18页
        1.2.6 毒株分类第18-19页
        1.2.7 内源性白血病病毒第19-20页
    1.3 流行病学第20-21页
        1.3.1 发病率第20页
        1.3.2 传播方式第20-21页
    1.4 病理生物学第21-22页
        1.4.1 临床症状第21页
        1.4.2 病理变化第21-22页
    1.5 禽白血病的检测和诊断第22-25页
        1.5.1 病原分离和鉴定第23页
        1.5.2 聚合酶链式反应(PCR)第23-24页
        1.5.3 血清学检测第24页
        1.5.4 鉴别诊断第24-25页
    1.6 致肿瘤机制第25-26页
    1.7 预防和控制第26-27页
        1.7.1 净化原代种鸡场第26页
        1.7.2 保持鸡群对 ALV 的高度洁净状态第26-27页
        1.7.3 政府部门强化种鸡群的监控第27页
    1.8 本研究的背景、目的及意义第27-28页
2 材料与方法第28-42页
    2.1 鸭群中禽白血病病毒 p27 基因的核酸检测第28-34页
        2.1.1 材料第28-30页
            2.1.1.1 鸭组织样品第28页
            2.1.1.2 菌种和载体第28页
            2.1.1.3 主要试剂第28页
            2.1.1.4 主要仪器第28页
            2.1.1.5 常规试剂及配制第28-30页
        2.1.2 方法第30-34页
            2.1.2.1 引物设计与合成第30页
            2.1.2.2 组织 DNA 的提取第30页
            2.1.2.3 目的片段的 PCR 扩增和纯化回收第30-31页
            2.1.2.4 目的片段与载体的连接第31-32页
            2.1.2.5 DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备第32页
            2.1.2.6 连接产物的转化第32页
            2.1.2.7 质粒 DNA 的提取第32-33页
            2.1.2.8 重组质粒酶切鉴定第33-34页
            2.1.2.9 阳性克隆序列的测定第34页
    2.2 禽白血病病毒 env 基因的 PCR 扩增第34页
        2.2.1 材料第34页
        2.2.2 方法第34页
            2.2.2.1 引物设计与合成第34页
            2.2.2.2 env基因的PCR扩增和纯化回收第34页
            2.2.2.3 目的片段与载体的连接第34页
            2.2.2.4 DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备第34页
            2.2.2.5 连接产物的转化第34页
            2.2.2.6 质粒 DNA 的提取第34页
            2.2.2.7 重组质粒酶切鉴定第34页
            2.2.2.8 阳性克隆序列的测定第34页
    2.3 ALV-B 单因子血清的制备第34-39页
        2.3.1 材料第34-35页
        2.3.2 方法第35-39页
            2.3.2.1 设计引物第35页
            2.3.2.2 四段基因的 PCR 扩增和纯化回收第35页
            2.3.2.3 目的片段与载体的连接第35页
            2.3.2.4 Rosetta(DE3)PLys 感受态细胞的制备第35-36页
            2.3.2.5 连接产物的转化第36页
            2.3.2.6 重组质粒 DNA 的提取第36页
            2.3.2.7 重组质粒的 PCR 鉴定第36页
            2.3.2.8 重组质粒的诱导表达第36页
            2.3.2.9 表达蛋白的 SDS-PAGE 检测第36-38页
            2.3.2.10 重组蛋白的大量表达和纯化第38页
            2.3.2.11 免疫疫苗的制备及免疫第38-39页
    2.4 四种单因子血清分别与 A、B 和 J 型 ALV 分别作 IFA 区分鉴定第39-42页
        2.4.1 材料第39页
        2.4.2 方法第39-42页
            2.4.2.1 病毒感染细胞 DNA 的提取及 ELISA 检测第39-41页
            2.4.2.2 单因子血清对已知 ALV-A、ALV-B 与 ALV-J 的间接免疫荧光(IFA)鉴定第41-42页
3 结果与分析第42-51页
    3.1 鸭群中禽白血病病毒 p27 基因的核酸检测第42-44页
        3.1.1 p27 基因的 PCR 扩增结果第42页
        3.1.2 ALV P27 基因在不同地区鸭群中的携带率分析第42-43页
        3.1.3 p27 基因的测序结果第43-44页
    3.2 env 基因的 PCR 扩增第44-47页
        3.2.1 env 基因的扩增结果第44-45页
        3.2.2 env 基因的序列比对结第45-47页
        3.2.3 env 基因与 ALV 参考株 env 基因的同源性分析结果第47页
    3.3 ALV-B 单因子血清与 A、B 和 J 型 ALV 分别作 IFA 区分鉴定第47-51页
        3.3.1 四段基因的 PCR 扩增结果第47-48页
        3.3.2 四段基因重组质粒的 PCR 鉴定第48页
        3.3.3 SDS-PAGE 凝胶分析第48-49页
        3.3.4 IFA 鉴定结果第49-51页
4 讨论第51-54页
5 结论第54-55页
参考文献第55-62页
致谢第62页

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