符号及缩略词 | 第4-10页 |
中文摘要 | 第10-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
1 引言 | 第13-28页 |
1.1 禽白血病的研究概述 | 第13-14页 |
1.2 病原学 | 第14-20页 |
1.2.1 分类 | 第14页 |
1.2.2 病毒形态 | 第14-15页 |
1.2.3 化学组成 | 第15页 |
1.2.4 基因组结构与功能 | 第15-17页 |
1.2.5 病毒复制 | 第17-18页 |
1.2.6 毒株分类 | 第18-19页 |
1.2.7 内源性白血病病毒 | 第19-20页 |
1.3 流行病学 | 第20-21页 |
1.3.1 发病率 | 第20页 |
1.3.2 传播方式 | 第20-21页 |
1.4 病理生物学 | 第21-22页 |
1.4.1 临床症状 | 第21页 |
1.4.2 病理变化 | 第21-22页 |
1.5 禽白血病的检测和诊断 | 第22-25页 |
1.5.1 病原分离和鉴定 | 第23页 |
1.5.2 聚合酶链式反应(PCR) | 第23-24页 |
1.5.3 血清学检测 | 第24页 |
1.5.4 鉴别诊断 | 第24-25页 |
1.6 致肿瘤机制 | 第25-26页 |
1.7 预防和控制 | 第26-27页 |
1.7.1 净化原代种鸡场 | 第26页 |
1.7.2 保持鸡群对 ALV 的高度洁净状态 | 第26-27页 |
1.7.3 政府部门强化种鸡群的监控 | 第27页 |
1.8 本研究的背景、目的及意义 | 第27-28页 |
2 材料与方法 | 第28-42页 |
2.1 鸭群中禽白血病病毒 p27 基因的核酸检测 | 第28-34页 |
2.1.1 材料 | 第28-30页 |
2.1.1.1 鸭组织样品 | 第28页 |
2.1.1.2 菌种和载体 | 第28页 |
2.1.1.3 主要试剂 | 第28页 |
2.1.1.4 主要仪器 | 第28页 |
2.1.1.5 常规试剂及配制 | 第28-30页 |
2.1.2 方法 | 第30-34页 |
2.1.2.1 引物设计与合成 | 第30页 |
2.1.2.2 组织 DNA 的提取 | 第30页 |
2.1.2.3 目的片段的 PCR 扩增和纯化回收 | 第30-31页 |
2.1.2.4 目的片段与载体的连接 | 第31-32页 |
2.1.2.5 DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
2.1.2.6 连接产物的转化 | 第32页 |
2.1.2.7 质粒 DNA 的提取 | 第32-33页 |
2.1.2.8 重组质粒酶切鉴定 | 第33-34页 |
2.1.2.9 阳性克隆序列的测定 | 第34页 |
2.2 禽白血病病毒 env 基因的 PCR 扩增 | 第34页 |
2.2.1 材料 | 第34页 |
2.2.2 方法 | 第34页 |
2.2.2.1 引物设计与合成 | 第34页 |
2.2.2.2 env基因的PCR扩增和纯化回收 | 第34页 |
2.2.2.3 目的片段与载体的连接 | 第34页 |
2.2.2.4 DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
2.2.2.5 连接产物的转化 | 第34页 |
2.2.2.6 质粒 DNA 的提取 | 第34页 |
2.2.2.7 重组质粒酶切鉴定 | 第34页 |
2.2.2.8 阳性克隆序列的测定 | 第34页 |
2.3 ALV-B 单因子血清的制备 | 第34-39页 |
2.3.1 材料 | 第34-35页 |
2.3.2 方法 | 第35-39页 |
2.3.2.1 设计引物 | 第35页 |
2.3.2.2 四段基因的 PCR 扩增和纯化回收 | 第35页 |
2.3.2.3 目的片段与载体的连接 | 第35页 |
2.3.2.4 Rosetta(DE3)PLys 感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
2.3.2.5 连接产物的转化 | 第36页 |
2.3.2.6 重组质粒 DNA 的提取 | 第36页 |
2.3.2.7 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第36页 |
2.3.2.8 重组质粒的诱导表达 | 第36页 |
2.3.2.9 表达蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第36-38页 |
2.3.2.10 重组蛋白的大量表达和纯化 | 第38页 |
2.3.2.11 免疫疫苗的制备及免疫 | 第38-39页 |
2.4 四种单因子血清分别与 A、B 和 J 型 ALV 分别作 IFA 区分鉴定 | 第39-42页 |
2.4.1 材料 | 第39页 |
2.4.2 方法 | 第39-42页 |
2.4.2.1 病毒感染细胞 DNA 的提取及 ELISA 检测 | 第39-41页 |
2.4.2.2 单因子血清对已知 ALV-A、ALV-B 与 ALV-J 的间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第41-42页 |
3 结果与分析 | 第42-51页 |
3.1 鸭群中禽白血病病毒 p27 基因的核酸检测 | 第42-44页 |
3.1.1 p27 基因的 PCR 扩增结果 | 第42页 |
3.1.2 ALV P27 基因在不同地区鸭群中的携带率分析 | 第42-43页 |
3.1.3 p27 基因的测序结果 | 第43-44页 |
3.2 env 基因的 PCR 扩增 | 第44-47页 |
3.2.1 env 基因的扩增结果 | 第44-45页 |
3.2.2 env 基因的序列比对结 | 第45-47页 |
3.2.3 env 基因与 ALV 参考株 env 基因的同源性分析结果 | 第47页 |
3.3 ALV-B 单因子血清与 A、B 和 J 型 ALV 分别作 IFA 区分鉴定 | 第47-51页 |
3.3.1 四段基因的 PCR 扩增结果 | 第47-48页 |
3.3.2 四段基因重组质粒的 PCR 鉴定 | 第48页 |
3.3.3 SDS-PAGE 凝胶分析 | 第48-49页 |
3.3.4 IFA 鉴定结果 | 第49-51页 |
4 讨论 | 第51-54页 |
5 结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-62页 |
致谢 | 第62页 |