| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 古菌简介 | 第10-11页 |
| 1.2 硫化叶菌简介 | 第11-13页 |
| 1.3 反螺旋酶 | 第13-18页 |
| 1.4 古菌转录起始控制元件 | 第18-22页 |
| 2 同源重组法敲除反螺旋酶基因 | 第22-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 主要的化学药品 | 第22-24页 |
| 2.1.3 主要的化学试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基及组分 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要操作试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 敲除载体的构建及基因敲除原理 | 第27-30页 |
| 2.2.2 敲除载体转化硫化叶菌 | 第30-31页 |
| 2.2.3 双交换转化子的验证 | 第31-32页 |
| 2.2.4 反螺旋酶缺失株的反筛选 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-39页 |
| 2.3.1 目的片段的扩增 | 第33-34页 |
| 2.3.2 敲除载体的酶切验证 | 第34-35页 |
| 2.3.3 双交换转化子的PCR验证 | 第35-36页 |
| 2.3.4 反筛选 | 第36-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-42页 |
| 2.4.1 基因敲除方法的建立 | 第39-40页 |
| 2.4.2 RG基因缺失突变株的筛选 | 第40页 |
| 2.4.3 反螺旋酶对细胞生长的影响 | 第40-42页 |
| 3 硫化叶菌转录起始控制元件的研究 | 第42-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第42页 |
| 3.1.2 主要药品 | 第42页 |
| 3.1.3 培养基及组分 | 第42页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第42页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.6 主要试剂盒 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-50页 |
| 3.2.1 PZC1-1300等八个报告质粒的构建 | 第43-46页 |
| 3.2.2 电转化硫化叶菌 | 第46页 |
| 3.2.3. β-半乳糖苷酶(LacS)酶活分析 | 第46-47页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR检测LacS转录水平差异 | 第47-50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-56页 |
| 3.3.1 启动子和相应LacS片段的扩增 | 第50-51页 |
| 3.3.2 重叠延伸PCR构建启动子和相应LacS片段的融合基因 | 第51-52页 |
| 3.3.3 报告质粒的构建 | 第52页 |
| 3.3.4 β-半乳糖苷酶(LacS)酶活分析 | 第52-53页 |
| 3.3.5 总RNA提取 | 第53-54页 |
| 3.3.6 内参基因Cdc6-2和目标基因lacS的扩增效率 | 第54-55页 |
| 3.3.7 S-3118、S-3118IE lacS mRNA转录水平差异 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 3.4.1 重叠延伸PCR | 第56页 |
| 3.4.2 IE序列对lacS酶活的影响 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
