| 本论文的创新点及意义 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 前言 | 第17-47页 |
| 1.1 高等植物胚胎发生 | 第17-27页 |
| 1.1.1 合子不等分裂的调控机制 | 第18-19页 |
| 1.1.2 顶基细胞命运决定的可能机理 | 第19页 |
| 1.1.3 植物胚胎发生中的模式建成 | 第19-26页 |
| 1.1.3.1 顶基轴向的建立 | 第20-24页 |
| 1.1.3.1.1 顶端分生组织的形成 | 第21-23页 |
| 1.1.3.1.2 胚根的特化和形成 | 第23-24页 |
| 1.1.3.2 辐射轴向的建立 | 第24-26页 |
| 1.1.3.2.1 表皮的形成 | 第25页 |
| 1.1.3.2.2 内皮和皮层的形成 | 第25-26页 |
| 1.1.3.2.3 维管束的形成 | 第26页 |
| 1.1.4 细胞通讯在植物胚胎发生中的作用 | 第26-27页 |
| 1.2 胚柄的功能 | 第27-31页 |
| 1.2.1 胚柄的形成与分化 | 第27-30页 |
| 1.2.1.1 来自合子转录本在不对称分布对胚柄细胞分化的影响 | 第28-29页 |
| 1.2.1.2 细胞信号转导在胚柄分化中的作用 | 第29-30页 |
| 1.2.2 胚柄在胚胎发生中起重要作用 | 第30-31页 |
| 1.2.2.1 向胚体传输营养及生长调节物质 | 第30页 |
| 1.2.2.2 作为植物激素生物合成的场所 | 第30-31页 |
| 1.3 植物细胞命运决定机制 | 第31-34页 |
| 1.3.1 不等分裂 | 第31-33页 |
| 1.3.1.1 细胞骨架的极性分布 | 第31-32页 |
| 1.3.1.2 细胞器的极性分布 | 第32页 |
| 1.3.1.3 细胞内蛋白的极性定位 | 第32-33页 |
| 1.3.2 位置信息 | 第33-34页 |
| 1.4 体外胚胎发生培养系统 | 第34-40页 |
| 1.4.1 体细胞胚胎发生 | 第34-37页 |
| 1.4.2 雄配子胚胎发生 | 第37-38页 |
| 1.4.3 合子及胚胎培养 | 第38-40页 |
| 1.5 光激活荧光蛋白 | 第40-41页 |
| 1.6 激光显微切割技术 | 第41-44页 |
| 1.7 本文关注的问题和研究目的 | 第44-47页 |
| 第二章 对烟草原胚发育模式的显微观察 | 第47-56页 |
| 摘要 | 第47-48页 |
| 2.1 材料与方法 | 第48-49页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 2.1.2 胚珠的整体透明 | 第48页 |
| 2.1.3 胚的分离 | 第48-49页 |
| 2.1.4 观察与图像分析 | 第49页 |
| 2.2 结果 | 第49-54页 |
| 2.2.1 利用整体透明法观察烟草早期胚胎 | 第49-50页 |
| 2.2.2 利用酶解分离法观察烟草早期胚胎 | 第50-51页 |
| 2.2.3 两种观察方法在观察烟草胚胎过程中的比较 | 第51-52页 |
| 2.2.4 基于两种方法观察到的烟草早期胚胎发生模式 | 第52-54页 |
| 2.3 讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 烟草二胞原胚体外培养系统的改进及多胺在胚胎发生过程中的作用 | 第56-67页 |
| 摘要 | 第56-58页 |
| 3.1 材料和方法 | 第58-59页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第58页 |
| 3.1.2 烟草胚胎的分离 | 第58页 |
| 3.1.3 子房消毒 | 第58页 |
| 3.1.4 制备饲养系统 | 第58-59页 |
| 3.1.5 胚胎培养 | 第59页 |
| 3.1.6 培养基的制备 | 第59页 |
| 3.1.7 观察与图像分析 | 第59页 |
| 3.1.8 数据统计 | 第59页 |
| 3.2 实验结果 | 第59-63页 |
| 3.2.1 不同激素水平对二胞原胚离体发育的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.2 多胺在烟草早期二细胞原胚离体培养过程中的作用 | 第60-61页 |
| 3.2.3 精胺在早期不同时期胚胎离体发生过程中的作用 | 第61-62页 |
| 3.2.4 多胺在BY-2细胞系分裂生长中的作用 | 第62-63页 |
| 3.3 讨论 | 第63-67页 |
| 3.3.1 生长素与胚胎发生的关系 | 第63-64页 |
| 3.3.2 亚精胺在胚胎发生及细胞分裂中的作用 | 第64-66页 |
| 3.3.3 亚精胺与植物生长素等激素的关系 | 第66-67页 |
| 第四章 利用激光显微切割技术获得单独的顶细胞 | 第67-76页 |
| 摘要 | 第67-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第68页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第68页 |
| 4.1.2 子房消毒与二胞原胚的分离 | 第68页 |
| 4.1.3 切割所用仪器及装置 | 第68页 |
| 4.1.4 胞原胚和顶细胞的细胞学观察与摄影 | 第68页 |
| 4.2 实验结果 | 第68-73页 |
| 4.2.1 利用激光显微切割技术获取单个顶细胞并检测其活性 | 第68-71页 |
| 4.2.2 独立顶细胞发育潜能的检验 | 第71-73页 |
| 4.3 讨论 | 第73-76页 |
| 4.3.1 激光参数的设置对顶细胞活性的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.2 基细胞不同残留程度对顶细胞活力及发育影响 | 第74-76页 |
| 第五章 顶细胞的离体发育 | 第76-87页 |
| 摘要 | 第76-77页 |
| 5.1 材料与方法 | 第77-78页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第77页 |
| 5.1.2 子房消毒与二胞原胚的分离 | 第77页 |
| 5.1.3 切割所用仪器及装置 | 第77页 |
| 5.1.4 顶细胞及发育产物的细胞学观察与摄影 | 第77页 |
| 5.1.5 植物组织及细胞RNA的提取 | 第77-78页 |
| 5.1.6 统计分析 | 第78页 |
| 5.2 实验结果 | 第78-82页 |
| 5.2.1 顶细胞发育产物的胚性检测 | 第78-80页 |
| 5.2.2 顶细胞第一次分裂面的方向性 | 第80页 |
| 5.2.3 顶细胞持续分裂模式 | 第80-82页 |
| 5.3 讨论 | 第82-87页 |
| 5.3.1 顶细胞发育过程中胚性的保持 | 第82-83页 |
| 5.3.2 基细胞的缺失对顶细胞第一次分裂的影响 | 第83-84页 |
| 5.3.3 顶细胞在体外进行离体生长分裂的基本模式 | 第84-86页 |
| 5.3.4 顶细胞的独立分裂方式与自身命运的联系 | 第86-87页 |
| 第六章 利用光激活绿色荧光蛋白研究顶、基细胞间物质交流 | 第87-107页 |
| 摘要 | 第87-88页 |
| 6.1 材料与方法 | 第88-95页 |
| 6.1.1 材料 | 第88页 |
| 6.1.1.1 植物材料 | 第88页 |
| 6.1.1.2 主要菌种和试剂 | 第88页 |
| 6.1.2 烟草体内胚胎的分离 | 第88-89页 |
| 6.1.4 观察与摄影 | 第89页 |
| 6.1.5 PAGFP转基因烟草的获得 | 第89-95页 |
| 6.1.5.1 PAGFP序列全长的获得 | 第89-90页 |
| 6.1.5.2 酶切 PCAMBIA1302 和 PAGFP 片段 | 第90页 |
| 6.1.5.3 回收、连接pCAMBIA1302片段和PAGFP片段 | 第90页 |
| 6.1.5.4 转化连接产物 | 第90-91页 |
| 6.1.5.5 PCR鉴定转化菌落 | 第91-92页 |
| 6.1.5.6 ProNtDRP：：PAGFP质粒的构建 | 第92-93页 |
| 6.1.5.7 烟草转基因及初步鉴定 | 第93-95页 |
| 6.2 实验结果 | 第95-103页 |
| 6.2.1 ProNtDRP：：PAGFP光激活绿色荧光蛋白载体的构建 | 第95-96页 |
| 6.2.2 转基植株的获得及验证 | 第96-98页 |
| 6.2.3 PAGFP的显微观察及参数设置 | 第98-101页 |
| 6.2.4 PAGFP在二胞原胚中顶基细胞间的流动情况 | 第101-103页 |
| 6.3 讨论 | 第103-107页 |
| 6.3.1 PAGFP在不同细胞中的分布情况 | 第103页 |
| 6.3.2 顶基细胞间的物质运输方向性 | 第103-107页 |
| 第七章 定点损伤胚柄细胞后胚柄与胚体发育的观察 | 第107-112页 |
| 摘要 | 第107-108页 |
| 7.1 材料与方法 | 第108页 |
| 7.1.1 材料 | 第108页 |
| 7.1.2 烟草胚的分离方法 | 第108页 |
| 7.1.3 观察与摄影 | 第108页 |
| 7.2 实验结果 | 第108-110页 |
| 7.2.1 激光切割早前期球形胚中胚柄的最顶端细胞 | 第108-109页 |
| 7.2.2 切割早前期球形胚中胚柄最顶端细胞后胚体的发育情况 | 第109-110页 |
| 7.3 讨论 | 第110-112页 |
| 7.3.1 对晚期胚进行激光切割的操作可行性 | 第110页 |
| 7.3.2 胚体与胚柄的相互作用关系 | 第110-112页 |
| 第八章 总讨论 | 第112-118页 |
| 8.1 离体条件下顶细胞的发育命运 | 第113-114页 |
| 8.2 顶细胞与基细胞的关系 | 第114-116页 |
| 8.3 胚体与胚柄的关系 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-140页 |
| 在读期间发表的论文 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
