| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1.1 植物花发育相关基因的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.1.1 花发育模型 | 第14-15页 |
| 1.1.2 矮牵牛中花器官同源异型基因 | 第15-17页 |
| 1.2 植物启动子研究进展 | 第17-27页 |
| 1.2.1 启动子的结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 启动子的类型 | 第18-23页 |
| 1.2.2.1 组成型启动子 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 诱导型启动子 | 第19-20页 |
| 1.2.2.3 组织特异性启动子 | 第20-23页 |
| 1.2.3 启动子的分离方法 | 第23-25页 |
| 1.2.3.1 基因组DNA步移 | 第23-24页 |
| 1.2.3.2 启动子探针载体筛选启动子 | 第24页 |
| 1.2.3.3 启动子陷阱 | 第24页 |
| 1.2.3.4 反向PCR | 第24页 |
| 1.2.3.5 热不对称交错PCR | 第24-25页 |
| 1.2.4 启动子的常用研究策略 | 第25-27页 |
| 1.2.4.1 生物信息学对启动子进行预测分析 | 第25-26页 |
| 1.2.4.2 组织化学染色及荧光分析 | 第26页 |
| 1.2.4.3 缺失分析 | 第26页 |
| 1.2.4.4 凝胶阻滞试验 | 第26-27页 |
| 1.2.4.5 酵母单杂交技术 | 第27页 |
| 1.2.4.6 染色质免疫共沉淀法 | 第27页 |
| 1.2.4.7 定点突变分析 | 第27页 |
| 1.3 本课题研究的意义 | 第27-29页 |
| 第二章 矮牵牛C类基因FBP6启动子的克隆及其功能分析 | 第29-48页 |
| 2.1 前言 | 第29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.2.2 菌株、载体和感受态细胞 | 第29页 |
| 2.2.3 主要试剂与药品 | 第29-30页 |
| 2.2.4 实验引物 | 第30页 |
| 2.2.5 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.2.5.1 启动子pFBP6的分离克隆 | 第30-33页 |
| 2.2.5.2 生物信息学对启动子进行预测分析 | 第33页 |
| 2.2.5.3 启动子pFBP6系列5’缺失表达载体构建 | 第33-34页 |
| 2.2.5.4 根瘤农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第34-35页 |
| 2.2.5.5 转基因烟草的PCR阳性检测 | 第35页 |
| 2.2.5.6 GUS组织化学染色 | 第35-36页 |
| 2.2.5.7 GUS活性的荧光定量检测 | 第36-37页 |
| 2.3 结果与分析 | 第37-48页 |
| 2.3.1 pFBP6启动子的克隆及序列分析 | 第37-41页 |
| 2.3.2 pFBP6启动子全长及不同缺失片段表达载体构建 | 第41-42页 |
| 2.3.3 转基因烟草的阳性检测 | 第42-44页 |
| 2.3.4 组织化学染色分析pFBP6全长及各缺失片段的表达模式 | 第44-45页 |
| 2.3.5 启动子pFBP6及系列缺失片段花器官GUS活性定量测定 | 第45-48页 |
| 第三章 矮牵牛D类基因FBP11启动子的克隆及其功能分析 | 第48-66页 |
| 3.1 前言 | 第48页 |
| 3.2 材料与方法 | 第48-54页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第48页 |
| 3.2.2 主要试剂与药品 | 第48-49页 |
| 3.2.3 菌株、载体和感受态细胞 | 第49页 |
| 3.2.4 实验方法 | 第49-54页 |
| 3.2.4.1 启动子pFBP11的分离克隆 | 第49-51页 |
| 3.2.4.2 启动子pFBP11及系列5’缺失表达载体构建 | 第51-52页 |
| 3.2.4.3 烟草的遗传转化及阳性转基因植株检测 | 第52页 |
| 3.2.4.4 组织化学染色及GUS活性定量检测 | 第52页 |
| 3.2.4.5 RNA的抽提 | 第52-53页 |
| 3.2.4.6 RT-PCR检测 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-66页 |
| 3.3.1 pFBP11启动子的克隆及序列分析 | 第54-58页 |
| 3.3.2 pFBP11启动子全长及不同缺失片段表达载体构建 | 第58-60页 |
| 3.3.3 转基因烟草的阳性检测 | 第60页 |
| 3.3.4 组织化学染色分析pFBP11全长及各缺失片段的表达模式 | 第60-62页 |
| 3.3.5 启动子pFBP11及系列缺失片段花器官GUS活性定量测定 | 第62-64页 |
| 3.3.6 RT-PCR检测GUS基因在转基因烟草中的表达模式 | 第64-66页 |
| 第四章 矮牵牛E类基因FBP2启动子的克隆及其功能分析 | 第66-77页 |
| 4.1 前言 | 第66页 |
| 4.2 材料与方法 | 第66-70页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第66页 |
| 4.2.2 菌株、载体和感受态细胞 | 第66页 |
| 4.2.3 主要试剂与药品 | 第66-67页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第67-70页 |
| 4.2.4.1 启动子pFBP2的分离克隆 | 第67-69页 |
| 4.2.4.2 启动子pFBP2表达载体构建 | 第69-70页 |
| 4.2.4.3 烟草的遗传转化及阳性转基因植株检测 | 第70页 |
| 4.2.4.4 组织化学染色及GUS活性定量检测 | 第70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-77页 |
| 4.3.1 pFBP2启动子的克隆及序列分析 | 第70-73页 |
| 4.3.2 pFBP2启动子表达载体构建 | 第73-74页 |
| 4.3.3 转基因烟草的阳性检测 | 第74-75页 |
| 4.3.4 组织化学染色分析pFBP2启动子的表达模式 | 第75页 |
| 4.3.5 GUS活性定量鉴定启动子pFBP2表达模式 | 第75-77页 |
| 第五章 矮牵牛D类基因FBP11 5'-UTR区第一个内含子的分离 | 第77-88页 |
| 5.1 前言 | 第77页 |
| 5.2 材料与方法 | 第77-80页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第77页 |
| 5.2.2 菌株、载体和感受态细 | 第77页 |
| 5.2.3 实验方法 | 第77-80页 |
| 5.2.3.1 矮牵牛FBP11 5'-UTR区第一个内含子的分离克隆 | 第77-78页 |
| 5.2.3.2 生物信息学对内含子进行预测分析 | 第78页 |
| 5.2.3.3 内含子F_(11)I相关表达载体的构建 | 第78-80页 |
| 5.2.3.4 烟草的遗传转化及阳性转基因植株PCR检测 | 第80页 |
| 5.2.3.5 Southern杂交实验 | 第80页 |
| 5.2.3.6 组织化学染色及GUS活性荧光定量检测 | 第80页 |
| 5.3 结果与分析 | 第80-88页 |
| 5.3.1 矮牵牛FBP11 5'-UTR区第一个内含子F_(11)I的分离与序列分析 | 第80-81页 |
| 5.3.2 F_(11)I内含子相关表达载体构建 | 第81-82页 |
| 5.3.3 转基因烟草的阳性检测 | 第82-83页 |
| 5.3.4 转基因烟草的Southern blot检测 | 第83页 |
| 5.3.5 F_(11)I∷GUS转基因烟草表达模式分析 | 第83-85页 |
| 5.3.6 35S/fF_(11)I∷GUS和35S/rF_(11)I∷GUS转基因烟草表达模式分析 | 第85-88页 |
| 第六章 矮牵牛pFBP6、pFBP11组织特异性启动子的应用 | 第88-100页 |
| 6.1 材料与方法 | 第88-92页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第88页 |
| 6.1.2 菌株、载体和感受态细 | 第88页 |
| 6.1.3 实验方法 | 第88-92页 |
| 6.1.3.1 矮牵牛pFBP6,pFBP11启动子片段的克隆 | 第88页 |
| 6.1.3.2 表达载体pFBP6∷BARNASE、pFBP11∷BARNASE的构建 | 第88-90页 |
| 6.1.3.3 表达载体pFBP6∷BARNASE,pFBP11∷BARNASE转化烟草 | 第90页 |
| 6.1.3.4 表达载体pFBP11∷BARNASE转化番茄 | 第90-91页 |
| 6.1.3.5 转基因植株PCR检测 | 第91页 |
| 6.1.3.6 表达载体pFBP6∷BARNASE转基因烟草表型植株RT-PCR检测 | 第91页 |
| 6.1.3.7 转基因材料内源激素的测定 | 第91-92页 |
| 6.2 结果与分析 | 第92-98页 |
| 6.2.1 表达载体pFBP6∷BARNASE、pFBP11∷BARNASE的构建 | 第92页 |
| 6.2.2 转基因烟草的表型观测 | 第92-98页 |
| 6.2.2.1 表达载体pFBP6∷BARNASE转基因烟草的表型观测 | 第92-93页 |
| 6.2.2.2 表达载体pFBP11∷BARNASE转基因烟草的表型观测 | 第93-94页 |
| 6.2.2.3 表达载体pFBP11∷BARNASE转基因番茄的表型观测 | 第94-95页 |
| 6.2.2.4 表达载体pFBP6∷BARNASE转基因烟草表型植株RT-PCR检测 | 第95-97页 |
| 6.2.2.5 转基因材料内源激素水平测定 | 第97-98页 |
| 6.3 讨论 | 第98-100页 |
| 6.3.1 表达载体pFBP6∷BARNASE的功能分析及应用 | 第98页 |
| 6.3.2 表达载体pFBP11∷BARNASE的功能分析及应用 | 第98-100页 |
| 第七章 总结与展望 | 第100-105页 |
| 7.1 总结 | 第100-103页 |
| 7.1.1 启动子的克隆策略 | 第100页 |
| 7.1.2 启动子功能分析的策略 | 第100-101页 |
| 7.1.3 矮牵牛C类基因FBP6启动子的特征及应用 | 第101-102页 |
| 7.1.4 矮牵牛D类基因FBP11启动子的特征及应用 | 第102-103页 |
| 7.1.5 矮牵牛E类基因FBP2启动子的特征及应用 | 第103页 |
| 7.2 展望 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-119页 |
| 附录1 改良的CTAB法提取基因组DNA | 第119-120页 |
| 附录2 碱裂解法提取质粒DNA(小量法) | 第120-121页 |
| 附录3 大肠杆菌热激感受态的制备及热激法转化 | 第121-122页 |
| 附录4 农杆菌电转感受态的制备 | 第122-123页 |
| 附录5 矮牵牛、烟草总RNA的提取 | 第123-124页 |
| 附录6 southern杂交实验步骤 | 第124-128页 |
| 附录7 Genebank注册基因登录号 | 第128-132页 |
| 博士在读期间已发表文章 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
