| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-37页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第15-16页 |
| 1.2 文献综述 | 第16-36页 |
| 1.2.1 骨骼肌的发育 | 第16-17页 |
| 1.2.2 microRNAs研究概述 | 第17-25页 |
| 1.2.3 骨骼肌发育相关microRNAs的研究进展 | 第25-30页 |
| 1.2.4 miR-29的研究进展及与肌肉发育相关的功能研究 | 第30-33页 |
| 1.2.5 miR-195/497的研究进展及与肌肉发育相关的功能研究 | 第33-35页 |
| 1.2.6 Akt3功能的研究进展 | 第35-36页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-53页 |
| 2.1 本研究的技术路线 | 第37页 |
| 2.2 细胞和动物 | 第37-38页 |
| 2.3 细胞转染 | 第38-39页 |
| 2.3.1 细胞转染方法 | 第38-39页 |
| 2.3.2 细胞转染所用的miRNA模拟物 | 第39页 |
| 2.4 RNA的提取及检测 | 第39-40页 |
| 2.4.1 RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.4.2 RNA的质量检测 | 第40页 |
| 2.5 Quantitative(Q)-PCR | 第40-41页 |
| 2.6 RNA印记技术(Northern Blot) | 第41-42页 |
| 2.7 蛋白质免疫印迹技术(Western Blot) | 第42-45页 |
| 2.7.1 试剂的配制 | 第42页 |
| 2.7.2 抗体 | 第42-43页 |
| 2.7.3 蛋白质的提取 | 第43页 |
| 2.7.4 蛋白质免疫印迹 | 第43-45页 |
| 2.8 免疫组织化学 | 第45-46页 |
| 2.8.1 石蜡切片制作 | 第45页 |
| 2.8.2 免疫组化SABC法染色 | 第45-46页 |
| 2.9 双荧光素酶报告基因系统分析 | 第46-49页 |
| 2.9.1 双荧光素酶报告基因载体构建 | 第46-48页 |
| 2.9.2 双荧光素酶报告基因重组载体与miRNA mimics在细胞内的互作 | 第48-49页 |
| 2.9.3 荧光素酶活性检测 | 第49页 |
| 2.10 细胞增殖测定相关研究方法 | 第49-51页 |
| 2.10.1 流式细胞仪分析细胞周期 | 第49页 |
| 2.10.2 xCELLigence细胞实时定量监控系统 | 第49-50页 |
| 2.10.3 EdU标记染色检测细胞增殖 | 第50-51页 |
| 2.11 免疫荧光 | 第51页 |
| 2.12 pcDNA-3.1-Akt3超表达载体构建 | 第51-52页 |
| 2.13 生物信息学相关查阅工具 | 第52页 |
| 2.14 数据统计分析 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-93页 |
| 3.1 miR-29在猪和小鼠骨骼肌发育过程中的表达情况 | 第53-57页 |
| 3.1.1 miR-29c在猪骨骼肌发育不同阶段的表达 | 第53-54页 |
| 3.1.2 miR-29在出生后小鼠腿肌中的表达情况 | 第54页 |
| 3.1.3 miR-29在C2C12细胞分化过程中的表达情况 | 第54-57页 |
| 3.2 miR-29对C2C12成肌细胞增殖的影响 | 第57-63页 |
| 3.2.1 miR-29对C2C12细胞周期的影响 | 第57页 |
| 3.2.2 miR-29对C2C12细胞生长速度的影响 | 第57-60页 |
| 3.2.3 EdU标记检测miR-29对C2C12细胞增殖的影响 | 第60-63页 |
| 3.3 miR-29对C2C12成肌细胞分化的影响 | 第63-66页 |
| 3.3.1 免疫荧光检测miR-29对C2C12成肌细胞分化的作用 | 第63页 |
| 3.3.2 Q-PCR检测miR-29对C2C12成肌细胞分化的作用 | 第63-66页 |
| 3.4 miR-29在骨骼肌发育过程中发挥作用的靶基因 | 第66-71页 |
| 3.4.1 miR-29在骨骼肌发育过程中重要靶基因的预测 | 第66页 |
| 3.4.2 miR-29靶基因的双荧光素酶报告基因载体系统验证 | 第66-69页 |
| 3.4.3 miR-29靶基因的Western Blot验证 | 第69-70页 |
| 3.4.4 miR-29其他靶基因及相关蛋白的Western Blot验证 | 第70-71页 |
| 3.5 Akt3在小鼠骨骼肌发育过程中的表达情况 | 第71-74页 |
| 3.5.1 Akt3在小鼠骨骼肌发育过程中的表达情况 | 第71-73页 |
| 3.5.2 Akt3蛋白和miR-29在小鼠腿肌生长发育过程的表达关系 | 第73-74页 |
| 3.6 Akt3对C2C12成肌细胞增殖的影响 | 第74-79页 |
| 3.6.1 对Akt3进行抑制表达和超表达的效果 | 第74-76页 |
| 3.6.2 抑制Akt3表达对C2C12细胞周期的影响 | 第76页 |
| 3.6.3 超表达Akt3对C2C12细胞周期的影响 | 第76-79页 |
| 3.7 Akt3对C2C12成肌细胞分化的影响 | 第79-82页 |
| 3.7.1 免疫荧光检测Akt3对C2C12成肌细胞分化的影响 | 第79页 |
| 3.7.2 Q-PCR检测Akt3对C2C12成肌细胞分化的影响 | 第79-82页 |
| 3.8 Akt3的共同表达对miR-29改变的细胞增殖、分化表型的影响 | 第82-85页 |
| 3.8.1 Akt3的共同表达对miR-29改变的C2C12细胞增殖表型的影响 | 第82页 |
| 3.8.2 Akt3的共同表达对miR-29改变的C2C12细胞分化表型的影响 | 第82-85页 |
| 3.9 Ssc-miR-29b-2/c转录本在大白猪群体中的SNP | 第85-91页 |
| 3.9.1 miR-29b-2/c转录本上SNP位点的发现 | 第85-86页 |
| 3.9.2 miR-29b-2/c转录本上SNP位点在大白猪群体中的鉴定 | 第86页 |
| 3.9.3 miR-29b-2/c转录本的T/C多态与部分经济性状关联分析的结果 | 第86-88页 |
| 3.9.4 不同基因型个体中miR-29c的表达 | 第88-89页 |
| 3.9.5 miR-29与YY1在猪骨骼肌发育过程中的靶向关系 | 第89-91页 |
| 3.10 miR-195/497在小鼠骨骼肌发育过程中的表达情况及对成肌细胞增殖的影响 | 第91-93页 |
| 3.10.1 miR-195/497在出生后小鼠骨骼肌中的表达情况 | 第91-92页 |
| 3.10.2 miR-497对C2C12细胞周期的影响 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-99页 |
| 4.1 miR-29在骨骼肌生长发育过程中的表达模式分析 | 第93页 |
| 4.2 miR-29对C2C12成肌细胞的增殖和分化的影响 | 第93-94页 |
| 4.3 miR-29对Akt3的靶向调节及两者在小鼠骨骼肌发育过程中的表达关系 | 第94-95页 |
| 4.4 Akt3对成肌细胞增殖和分化的影响 | 第95-96页 |
| 4.5 miR-29的转录表达及对骨骼肌生长发育的调控 | 第96-97页 |
| 4.6 ssc-miR-29b-2/c的转录本上存在的T/C多态与猪骨骼肌生长发育的关系 | 第97-98页 |
| 4.7 miR-195/497在骨骼肌发育过程中的表达情况及对成肌细胞增殖的影响 | 第98-99页 |
| 5 小结 | 第99-101页 |
| 5.1 本研究的主要结果与结论 | 第99-100页 |
| 5.2 本研究的创新点与特色 | 第100页 |
| 5.3 本研究不足之处与进一步工作的建议 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-115页 |
| 攻读学位期间撰写论文题录 | 第115-116页 |
| 附录：个人简历 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
