| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 前言 | 第12-22页 |
| 1 昆虫免疫系统简介 | 第12-13页 |
| 1.1 昆虫的细胞免疫 | 第12页 |
| 1.2 昆虫的体液免疫 | 第12-13页 |
| 2 昆虫抗菌肽的研究 | 第13-19页 |
| 2.1 昆虫抗菌肽的分类 | 第13-16页 |
| 2.1.1 线性α-螺旋抗菌肽 | 第13-14页 |
| 2.1.2 含有半胱氨酸的抗菌肽 | 第14-15页 |
| 2.1.3 富含脯氨酸的抗菌肽 | 第15-16页 |
| 2.1.4 富含甘氨酸的抗菌肽 | 第16页 |
| 2.2 昆虫抗菌肽的活性 | 第16-17页 |
| 2.2.1 抗细菌活性 | 第16页 |
| 2.2.2 抗真菌活性 | 第16-17页 |
| 2.2.3 抗病毒活性 | 第17页 |
| 2.2.4 抗原虫活性 | 第17页 |
| 2.2.5 抗菌肽的其他活性 | 第17页 |
| 2.3 昆虫抗菌肽的作用机理 | 第17-19页 |
| 2.3.1 抗细菌作用机理 | 第17-19页 |
| 2.3.2 抗真菌作用机理 | 第19页 |
| 2.3.3 抗病毒作用机理 | 第19页 |
| 2.3.4 抗原虫作用机理 | 第19页 |
| 3 小菜蛾抗菌肽的研究概况 | 第19-21页 |
| 3.1 小菜蛾及其免疫系统的研究 | 第19-20页 |
| 3.2 小菜蛾抗菌肽的研究 | 第20-21页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第一章 小菜蛾抗菌肽moricins基因的克隆及分析 | 第22-33页 |
| 1 材料与方法 | 第22-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第22页 |
| 1.1.2 主要试剂的配置 | 第22-23页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 1.2.1 小菜蛾的饲养 | 第23页 |
| 1.2.2 小菜蛾幼虫总RNA的提取 | 第23页 |
| 1.2.3 小菜蛾cDNA的获得 | 第23页 |
| 1.2.4 PCR扩增moricins基因 | 第23页 |
| 1.2.5 PCR产物的纯化 | 第23-24页 |
| 1.2.6 连接反应 | 第24页 |
| 1.2.7 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 1.2.8 连接产物的转化 | 第24-25页 |
| 1.2.9 重组克隆子的鉴定 | 第25页 |
| 1.2.10 Moricins基因序列的分析 | 第25页 |
| 1.2.11 Moricins基因成熟肽序列理化性质的预测 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-31页 |
| 2.1 小菜蛾幼虫总RNA的电泳分析 | 第25-26页 |
| 2.2 小菜蛾moricins的PCR产物 | 第26页 |
| 2.3 重组质粒pEASY-PxMors的PCR鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.4 Moricins基因的序列分析 | 第27-29页 |
| 2.5 Moricins成熟肽的理化性质 | 第29-31页 |
| 3 小结与讨论 | 第31-33页 |
| 第二章 小菜蛾抗菌肽moricins基因的表达纯化 | 第33-45页 |
| 1 材料与方法 | 第33-39页 |
| 1.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第33页 |
| 1.1.2 主要试剂及配置 | 第33-34页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 1.2 实验方法 | 第34-39页 |
| 1.2.1 重组质粒的提取 | 第34页 |
| 1.2.2 重组表达载体pET-32a(+)-PxMors的构建 | 第34-36页 |
| 1.2.3 重组质粒的诱导表达 | 第36页 |
| 1.2.4 SDS-PAGE电泳分析 | 第36-37页 |
| 1.2.5 融合蛋白的大量表达及纯化 | 第37-38页 |
| 1.2.6 融合蛋白的肠激酶酶切 | 第38页 |
| 1.2.7 目的肽的超滤纯化 | 第38页 |
| 1.2.8 目的肽MALDI-TOF分析 | 第38-39页 |
| 1.2.9 目的肽的圆二色谱分析 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-43页 |
| 2.1 Moricins成熟肽的PCR产物 | 第39页 |
| 2.2 Moricins融合蛋白的诱导及纯化结果 | 第39-40页 |
| 2.3 Moricins融合蛋白的酶切分析及目的肽的纯化结果 | 第40-41页 |
| 2.4 PxMor2和PxMor3的分子量 | 第41-42页 |
| 2.5 PxMor2和PxMor3的二级结构 | 第42-43页 |
| 3 小结与讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 小菜蛾抗菌肽moricins基因的功能鉴定 | 第45-56页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 1.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 1.1.1 主要试剂及配置 | 第45页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第45-46页 |
| 1.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 1.2.1 液体生长抑制试验测moricins的最小抑菌浓度 | 第46页 |
| 1.2.2 PxMor2和PxMor3与肽聚糖的分子对接 | 第46页 |
| 1.2.3 MTT法测大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长抑制曲线 | 第46-47页 |
| 1.2.4 活细胞染色法测细胞通透性变化 | 第47页 |
| 1.2.5 扫描电镜测细菌细胞形态的变化 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-53页 |
| 2.1 小菜蛾moricins的抗菌活性 | 第48-50页 |
| 2.1.1 PxMor2和PxMor3的抗菌谱及活性差异的分析 | 第48-49页 |
| 2.1.2 PxMor2和PxMor3的细菌生长抑制曲线 | 第49-50页 |
| 2.2 小菜蛾moricins的抑菌机理 | 第50-53页 |
| 3 小结与讨论 | 第53-56页 |
| 第四章 总结 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
