| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 鞘糖脂 | 第15-17页 |
| 1.1.2 鞘糖脂的功能 | 第15-16页 |
| 1.1.3 合成鞘糖脂的糖基转移酶 | 第16-17页 |
| 1.2 棉铃虫Bt抗性机制及糖基转移酶基因介导的Bt抗性机制研究 | 第17-20页 |
| 1.2.1 棉铃虫Bt抗性机制的研究 | 第17-19页 |
| 1.2.2 糖基转移酶基因介导的Bt抗性机制 | 第19-20页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 棉铃虫糖基转移酶基因Harmbre2-4 的克隆和序列分析 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第22页 |
| 2.2 主要方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 棉铃虫总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 第一条cDNA链的合成 | 第23-24页 |
| 2.2.3 RACE-PCR所需cDNA第一链的合成 | 第24页 |
| 2.2.4 PCR反应 | 第24-27页 |
| 2.2.5 PCR产物纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.6 连接反应 | 第28页 |
| 2.2.7 转化反应 | 第28-29页 |
| 2.2.8 序列分析和系统发育树的构建 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-36页 |
| 2.3.1 棉铃虫糖基转移酶基因Harmbre2-4 的克隆及序列分析 | 第29-33页 |
| 2.3.2 系统发育树的构建 | 第33-36页 |
| 2.4 本章讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 棉铃虫糖基转移酶基因Harmbre2-5 的时空表达谱分析 | 第37-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第37-38页 |
| 3.2 主要方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 棉铃虫不同组织和不同龄期总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR所用第一链cDNA的合成 | 第38页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR分析 | 第38-40页 |
| 3.2.4 数据分析 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1 RNA质量检测 | 第40页 |
| 3.3.2 棉铃虫糖基转移酶基因Harmbre2-5 在棉铃虫不同龄期的表达差异 | 第40-41页 |
| 3.3.3 棉铃虫糖基转移酶基因Harmbre2-5 在棉铃虫不同组织的表达差异 | 第41-43页 |
| 3.4 本章讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 棉铃虫糖基转移酶HarmBre2、3 和5的亚细胞定位 | 第44-51页 |
| 4.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第45页 |
| 4.2 主要方法 | 第45-49页 |
| 4.2.1 引物设计和PCR扩增 | 第45-46页 |
| 4.2.2 PCR产物纯化及转化克隆载体 | 第46页 |
| 4.2.3 融合表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 4.2.4 菌种保存 | 第47页 |
| 4.2.5 质粒的提取 | 第47-48页 |
| 4.2.6 Hi5细胞 | 第48页 |
| 4.2.7 重组的质粒转染TH | 第48页 |
| 4.2.8 制片 | 第48-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-50页 |
| 4.3.1 棉铃虫糖基转移酶HarmBre2、3 和5的亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 4.4 本章讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 棉铃虫糖基转移酶基因Harmbre2-5 的RNAi研究 | 第51-55页 |
| 5.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 5.1.1 供试昆虫 | 第51页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第51-52页 |
| 5.2 主要方法 | 第52-53页 |
| 5.2.1 siRNA的合成与稀释 | 第52页 |
| 5.2.2 siRNA的注射及其沉默效率的检测 | 第52页 |
| 5.2.3 生物测定 | 第52页 |
| 5.2.4 数据统计分析 | 第52-53页 |
| 5.3 结果与分析 | 第53-54页 |
| 5.3.1 荧光定量PCR检测siRNA沉默效率 | 第53-54页 |
| 5.3.2 Harmbre基因沉默后对棉铃虫Bt抗性的影响 | 第54页 |
| 5.4 本章讨论 | 第54-55页 |
| 第六章 Harmbre2-5 在棉铃虫抗感品系间的结构和表达水平差异分析 | 第55-59页 |
| 6.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 6.1.1 供试昆虫 | 第55页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第55页 |
| 6.1.3 仪器设备 | 第55-56页 |
| 6.2 主要方法 | 第56-57页 |
| 6.2.1 Harmbre2-5 在棉铃虫抗感品系间的基因结构差异分析 | 第56页 |
| 6.2.2 Harmbre2-5 在棉铃虫抗感品系间的基因表达差异分析 | 第56-57页 |
| 6.2.3 数据处理 | 第57页 |
| 6.3 结果与分析 | 第57-58页 |
| 6.3.1 Harmbre2-5 在棉铃虫抗感品系间的基因结构差异分析 | 第57页 |
| 6.3.2 Harmbre2-5 在棉铃虫抗感品系间的基因表达差异分析 | 第57-58页 |
| 6.4 本章讨论 | 第58-59页 |
| 第七章 全文结论 | 第59-61页 |
| 7.1 主要结论 | 第59页 |
| 7.2 研究展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
